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植物生长调节剂对微型月亮rosahybrida的诱导 小型玫瑰是玫瑰家族的新品种。这是蔷薇科属多年生树木的一种多年生灌木，有落叶或半叶落。其株型矮小、花头众多且花色奇异, 全年均开放, 适合于盆栽。因其品性独特又被称为“钻石月季”, 花瓣可用于提取香料。据报道, 早在1996年产于丹麦的微型月季已高达3 500万株 (Müller et al., 1998) 。可见微型月季在园林绿化中具有不可或缺的价值。近年关于微型月季的快速繁殖和栽培已有一些研究和报道。其中沈国正 (2006) 以6个盆栽微型月季品种为实验材料进行离体培养, 以诱导腋芽增殖为繁殖途径获得了微型月季的再生植株。于冰沁 (2005) 和刘义存 (2007) 利用带芽 (腋芽) 茎段为外植体直接进行离体培养, 建立了微型月季的快速繁殖体系, 但繁殖频率较低。由于微型月季本身比较矮小, 利用常规扦插或嫁接等方法繁殖速度慢, 繁殖系数低, 成本高, 难以大规模应用 (宗树斌, 2010) 。因此, 建立高效、稳定且可用于遗传改良的微型月季离体再生体系具有重要意义。本实验以黄色新品种微型月季为研究对象, 探讨不同外植体对愈伤组织诱导的影响, 以及不同配比的植物生长调节剂对愈伤组织诱导、不定芽诱导和生根的影响, 建立了高频离体再生体系, 以期为微型月季的遗传改良奠定基础。 1 植物材料 1.1 ybridaol. 供试材料为微型月季 (Rosa hybrida L.) 。将植物材料培养于西北大学生命科学学院人工气候室, 经鉴定为新品种黄色微型月季。 1.2 灭菌2–3 取微型月季枝条在自来水下冲洗干净, 用75%乙醇表面消毒30–40秒, 再用0.1%Hg Cl2溶液灭菌2–6分钟, 无菌水冲洗3–5次。在无菌条件下将叶片、叶柄和茎段剪成0.5 cm见方的小块或1 cm的小段, 并露出新鲜伤口。 2 培训的组成和条件 2.1 培养基的制备 诱导愈伤组织和不定芽均以MS培养基为基础培养基 (含30 g·L–1蔗糖和7.0 g·L–1琼脂, p H 5.8–6.2) , 分别添加不同配比的6-BA、NAA、2, 4-D、TDZ, 并于121°C高压蒸汽灭菌25分钟。生根培养基分别用MS培养基+NAA、1/2MS培养基+NAA、1/4MS培养基+NAA或者直接用1/4MS基础培养基。培养条件为 (25±2) °C, 每天16小时光照, 光照强度为40μmol·m–2·s–1。 2.2 观察时间1:3–4周继代1次 选取经处理的外植体接种于不同激素配比 (表1) 的MS培养基上进行愈伤组织诱导。定期观察, 3–4周继代1次。统计愈伤组织诱导率, 筛选最适愈伤组织诱导培养基。 将生长6、9、12、15、21天 (不同叶龄) 的微型月季叶片接种于最适愈伤组织诱导培养基上, 并统计不同叶龄叶片对愈伤组织诱导的影响。 2.3 愈伤组织的诱导 外植体在愈伤组织诱导培养基上培养30天后, 挑选长势良好的愈伤组织, 接种于附加不同配比植物生长调节剂 (表2) 的培养基中进行不定芽诱导, 并统计愈伤组织分化率。 2.4 最适生根培养基的确定 将高1–2 cm且长势良好的再生苗分别移植到含有不同浓度NAA的MS、1/2MS、1/4MS生根培养基上诱导生根, 确定最适生根培养基。 2.5 培养苗、苗的栽植 将再生根生长状况良好的微型月季幼苗取出, 用流水缓慢地将根部残留的培养基冲洗干净 (注意不要伤及根部) , 移栽至土壤中炼苗1–7天。 2.6 统计学分析 每种植物生长调节剂配比的培养基至少接种3皿材料, 每皿接种8–10块。实验重复3次。所得数据均用Origin 8.0和Statist 6.0进行统计学分析。愈伤组织诱导率和再分化率的计算公式如下: 愈伤组织诱导率= (形成愈伤组织的外植体数/接种的外植体总数) ×100% 愈伤组织再分化率= (分化出不定芽的愈伤组织块数/接种的愈伤组织总块数) ×100% 3 结果与讨论 3.1 外植体的愈伤组织诱导 用叶片、叶柄和茎段为外植体进行愈伤组织诱导, 以采用叶片进行诱导效果最好。以6、9、12、15和21天不同叶龄的微型月季叶片为外植体进行愈伤组织诱导, 并对愈伤组织诱导情况进行为期4周的观察和统计。实验结果表明, 叶龄12天的微型月季叶片为最适外植体, 诱导率可达100%。而采用叶龄小于或者大于12天的叶片进行愈伤组织诱导, 其诱导效率均呈下降趋势, 下降程度与偏离12天叶龄的程度有关, 即偏离程度越大, 诱导率越低 (图1) 。 3.2 -ba和naa对愈伤组织分化的影响 2, 4-D、NAA和6-BA是植物体细胞胚发生的常用诱导激素。本实验以微型月季幼嫩叶片为外植体, 在附加不同配比的2, 4-D、NAA和6-BA的愈伤组织诱导培养基上培养