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动物对结核分枝杆菌的敏感性 淋巴结是一种综合性疾病，可以通过空气传播。只有核电站的患者才能感染。平均而言，每个感染淋巴结的患者每年可以感染10.15人。世界上一半以上的人都感染了结核杆菌。根据世界卫生组织的估计，世界上近1.3亿人感染了结核杆菌，即20亿人感染了结核菌。全球有活动性肺结核病人约2000万,每年新发结核病人约800~1000万,每年约有300万人死于结核病。卫生服务体系的不力,艾滋病和耐药结核的传播加剧了结核病对人类的威胁。据估计,如果不能有效控制结核病:2000年到2020年间,将有10亿人感染结核菌,2亿人将发展为结核病,3500万人将死于结核病。结核病已成为全世界成人因传染病而死亡的主要疾病之一。我国是全球22个结核病高负担国家之一,活动性肺结核病人数居世界第二位。 卡介苗(BCG) 是法国科学家Camille Guerin 和Charles Calmette在上个世纪第一个10年中开发出来的,1921年开始应用于人类,迄今已使用了80 多年。在世届卫生组织免疫接种扩大方案中,卡介苗作为目前唯一的结核病疫苗正在广泛使用。接种后可预防儿童发生结核病,特别是能防止那些严重类型的结核病,如结核性脑膜炎。虽然所有可获得疫苗免疫资料的Meta分析可产生50%的理论性保护率,但据估计卡介苗仅能预防因结核病导致所有死亡的5%。因此,抗结核病的新药与新型疫苗的研发迫在眉睫。然而,药物疗效分析、疫苗效果评价等都离不开结核病的实验动物模型。 1 小鼠的免疫反应特性 结核杆菌的发现者罗伯特科赫第一次使用小鼠作为实验模型,他发现接种结核分枝杆菌的小鼠能诱导出与人病变一样的自然过程。在上世纪40年代,当第一个有效治疗结核的化疗药正在开发之时,许多研究者认识到了小鼠作为新药成本效益评价模型的重要性。McKee等认为,用小鼠模型衡量药物有效性比其他动物模型更为准确。在Dubos和Pierce的一系列实验中,给以若干卡介苗亚株免疫的小鼠对结核有抵抗性。Collins和Mackaness在预防免疫和结核敏感性之间建立起联系;而Lefford建立了小鼠过继性免疫的模型。 结核分枝杆菌在小鼠体内生长情况已经被详细的描述,即感染在靶器官呈现出特征性分布。通常采用静脉内注射和气溶胶方式感染动物。结核分枝杆菌的感染过程和感染速度主要通过以下几个因素来调节: ① 细菌的毒力:这包括诸多方面,但脂质是最为关心的,因为它们能通过感染巨噬细胞而诱导细胞因子的产生,并且影响其清除氧自由基的能力。 ② 细菌存在的脏器:肝脏中细菌的繁殖速度赶不上脾脏,它们也会感染肺脏和肾脏组织中的吞噬细胞。这些细菌仅仅在免疫活性的小鼠体内生长,但是最终都会形成脓肿。 ③ 接种剂量:能够启动小鼠体内获得免疫反应前的延迟时间与接种剂量成相反的关系。 ④ 免疫反应的强度:不同品系的小鼠对结核杆菌的自然抵抗能力不同。如CBA、DBA/2、C3H、和129/SvJ近交系小鼠高度敏感,而BALB/c和C57BL/6小鼠高度抵抗。在一些小鼠品系中,牛型结核杆菌在肺脏中的繁殖程度不如人型。但是牛型(Ravenel)比人型(H37Rv)更容易杀死小鼠。 小鼠几乎没有迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH),通过气溶胶或肠外途径感染结核杆菌并不能形成真正的干酪样坏死,但可以引起T细胞介导的免疫反应。与其他动物相比,小鼠之所以被广泛使用是因为价格低廉、种群数量庞大、遗传背景清楚、免疫系统研究比较透彻、针对小鼠细胞因子及免疫细胞的试剂及抗体供应充足。已经有学者在人和小鼠的初始免疫反应间发现了相似之处。例如,小鼠的巨噬细胞使用其表面的Toll样受体来识别分枝杆菌抗原并诱导细胞因子的产生,而后者对肉芽肿的形成是至关重要的。小鼠感染结核后肉芽肿形成的过程与人类和其他易感动物(如豚鼠)并不相同,主要是因为产生初始抵抗和强烈的细胞反应,进而控制了细菌的增殖和疾病的进展。由于小鼠并不能形成明显的干酪样坏死,因此它们的肺损伤不能发展为空洞。 结核免疫主要是T细胞介导的,不能产生T细胞的裸鼠和严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠成为人们感兴趣的动物模型。裸鼠无毛且胸腺发育不全,由于其不能产生功能性T细胞,因此不能抵抗结核和其他分枝杆菌的感染。联合免疫缺陷小鼠由于缺乏T细胞和B细胞,与裸鼠一样也不能抵抗结核和其他分枝杆菌的感染。这两类小鼠模型常用于分离细胞群抵御分枝杆菌感染能力的检测。去胸腺(thymectomized,TXB)小鼠是另一种动物模型:在4周大时,小鼠胸腺被移除。经一周的恢复,小鼠被暴露于能杀死所有的分裂细胞,包括骨髓细胞的电离辐射下。由于T细胞缺陷,去胸腺小鼠对静脉途径感染的结核杆菌几乎没有抵抗力。