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几种保护氨基酸和赖氨酸的合成及性能研究 对于高产牛来说，微生物蛋白和非分解蛋白的氨基酸是不够的。灌注试验证明,大多数情况下,奶牛第一、二限制性氨基酸为蛋氨酸和赖氨酸,需要补充能够在小肠吸收的满足奶牛代谢需要的蛋氨酸和赖氨酸,但日粮中直接补充游离蛋氨酸和赖氨酸大部分会在瘤胃中被降解,导致进入小肠的蛋氨酸和赖氨酸减少;通过真胃和十二指肠灌注,给奶牛带来很大的负担和应激,并且也不适合于生产。研制过瘤胃保护蛋氨酸和赖氨酸产品对奶牛氨基酸营养深入研究有重要意义。本研究利用4种材料包被蛋氨酸和赖氨酸,并对其稳定性进行了体外和尼龙袋两种方法的检验,筛选出稳定性好的瘤胃保护蛋氨酸和赖氨酸各一种,并观测体外法与尼龙袋法测定结果的差异及分析体外法代替体内法的可能性。 1 材料和方法 1.1 日粮营养水平 选用4头装有永久性瘤胃和十二指肠瘘管的荷斯坦干乳牛。日喂两次(08:00和20:00), 日粮组成:玉米10.60%,豆粕3.64%,麦麸3.00%,棉粕2.00%,石粉0.20%,磷酸氢钙0.20%,食盐0.16%,预混料0.20%,羊草60%,苜蓿干草20%。日粮营养水平:NEL 5.1757 MJ/kg,CP 13.12%,钙0.812 7%,磷0.329 3%。每次饲喂精料2 kg,羊草6 kg,苜蓿草2 kg,自由饮水。 1.2 化学试剂及试剂 DL-蛋氨酸由日本住友化学株式会社提供(含量99%),L-赖氨酸盐酸盐由泰国味之素有限公司提供(含量98.5%),丙烯酸树脂Ⅳ号由上海浦力膜制剂辅料科技合作公司提供,乙基纤维素由国药集团化学试剂有限公司提供,氢化植物油由上海赫力斯特化工有限公司提供,羟丙基甲基纤维素由山东聊城阿华制药有限公司提供。保护蛋氨酸由丙烯酸树脂Ⅳ号,丙烯酸树脂Ⅳ号和乙基纤维素,丙烯酸树脂Ⅳ号和乙基纤维素及羟丙基甲基纤维素,乙基纤维素,丙烯酸树脂Ⅳ号和氢化植物油,氢化植物油分别包被,形成产品M1、M2、M3、M4、M5、M6。保护赖氨酸由丙烯酸树脂Ⅳ号和乙基纤维素,丙烯酸树脂Ⅳ号和羟丙基甲基纤维素,丙烯酸树脂Ⅳ号和氢化植物油,乙基纤维素和氢化植物油包被形成产品L1、L2、L3、L4。 1.3 测试方法 1.3.1 缓冲液对氮的释放率测定 体外试验方法根据Papas等提供的方法进行,准确称取1.0 g产品放入50 mL具塞试管底部,分别加入20 mL pH6.6、pH2.4的缓冲液,盖紧试管塞,在39℃恒温水浴锅内消化0、4、8、24、48 h,过滤,凯氏定氮法测定溶液中氮含量,以氮的消失率计算释放率。 1.3.2 瘤胃投入量 准确称取3 g产品放入12 cm×8 cm尼龙袋中(孔径为35～50 μm),于晨饲时投入瘤胃,每头牛12个袋。放置后于4、8、24、48 h取出尼龙袋,每一种保护性氨基酸每个时间点4个重复,取出尼龙袋后用中等流速的自来水冲洗干净,烘干,称重,用凯氏定氮法测定尼龙袋中残留的氮含量,以氮的消失率计算释放率。 1.3.3 剩余样品的释放率测定 真胃和小肠释放率根据Rossi等采用的移动尼龙袋法进行,将1 g样本放入6 cm×2.5 cm小尼龙袋,放入39℃、pH为2的0.2%的HCl-胃蛋白酶溶液中2.5 h,然后放入十二指肠瘘管内,从粪中回收,冲洗,干燥,每一种保护氨基酸4个重复,用凯氏定氮法测定剩余样品氮含量,以氮的消失率计算释放率。 1.4 试验结果分析 所有数据经Excell处理后,采用SAS统计软件GLM程序对试验结果进行方差分析和Duncan’s多重比较,回归分析采用SAS统计软件REC过程进行。 2 结果与分析 2.1 下表同属性refindsoin标准 体外法测定结果见表1。随着培养时间的延长,6种保护蛋氨酸在pH 6.6缓冲液中的释放率增加,稳定性降低,其中产品M2稳定性最好,除培养48 h与产品M5差异不显著外(P0.05),其他时间点及与其他保护产品之间差异极显著(P0.01);其次为产品M5,其在pH 6.6缓冲溶液中培养4～48 h的释放率极显著低于产品M1、M3、M4和M6(P0.01)。 表中同一列同一培养时间点肩标小写字母不同者差异显著(P0.05),大写字母不同者差异极显著(P0.01)。下表同 Values in the same column and same incubation time with different superscripts small letters are significantly different(P 0.05);Values with different capital letters are extremely different(P 0.01).The same as below 4种保护赖氨酸在pH6.6缓冲液中的释放率,随着