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坛紫菜自由柱状体的移植育苗研究 香茶是中国特有的品种。它有着数百年的食用历史，被广泛种植在福建、浙江和广东沿海地区。其产量约占全国蔬菜产量的75%。传统的坛紫菜苗种培育主要是将叶状体放散的果孢子泼洒到贝壳表面,果孢子钻壳后萌发成贝壳丝状体,经数月的培育,贝壳丝状体成熟形成壳孢子囊,并释放出壳孢子,后者附着于养殖网帘,下海养成大叶状体。 研究发现,紫菜的果孢子也可以在海水中直接萌发成丝状体,称为自由丝状体,紫菜自由丝状体的切碎藻丝还能重新钻入贝壳长成一个完整的藻落,利用这一特性可以将自由丝状体移植到贝壳内,进行紫菜苗种培育,此技术被称为自由丝状体移植育苗技术。该技术由日本学者创立,于20世纪70年代中期被我国引进,在坛紫菜育苗中也进行了成功试验。 近年来,在秋季坛紫菜壳孢子采苗后,经常遭遇高水温,导致壳孢子萌发和生长不良,给生产带来严重影响。为解决以上问题,国内学者利用诱变和杂交等育种方式,进行坛紫菜良种选育,以期培育出优良品种,提高坛紫菜的产量和质量。本实验室已经培育出耐高温的良种“申福1号”和优良品系“申福2号”,它们具有生长快、产量高、品质好、耐高温等优点,深受养殖者的欢迎。但是,由于上述优良品种(系)的叶状体在海区栽培时难成熟,无法获取果孢子作为种子。所以,大规模栽培“申福1号”和“申福2号”时只能利用自由丝状体作为种子,通过移植育苗技术来培育贝壳丝状体。至今,有关坛紫菜自由丝状体移植育苗的研究较少,本文以“申福1号”、“申福2号”和 野生型等3个品系为材料,就自由丝状体移植量、移植后培养的光密度和温度对贝壳丝状体的生长和壳孢子放散量的影响进行了较深入研究,旨在建立自由丝状体移植育苗技术,促进上述坛紫菜优良品种(系)的大规模推广应用。 1 材料和方法 1.1 自由网状体的培养 本实验使用的“申福1号”(SF-1)和“申福2号”(SF-2)两品系,均是通过诱变选育获得,并以自由丝状体的形式予以保存。野生型品系(WT)的分离方法及这3个品系的保存条件同文献。 实验中使用的贝壳为文蛤壳。经洗刷和水煮处理后,每15个贝壳为一组放入规格为20.5 cm×14 cm×5 cm的长方形塑料盒中进行自由丝状体移植和培养。使用的培养液为自然海水加MES培养基。 1.2 实验方法 1.2.1 小球物质体的移植 因贝壳基本铺满容器底部,可根据容器底面积和单位面积内的移植量,计算出移植所需的自由丝状体重量。将丝状体用吸水纸吸干,用电子天平称取所需丝状体,放入小型家用粉碎机,加入少量海水搅碎后,均匀泼洒在贝壳上。移植后在18 ℃,6 μmol photons/(m2·s) (14L∶10D)的暗光条件下培养4 d,然后将光密度提高至40 μmol photons/(m2·s)(14L∶10D),以促进丝状体生长。 自由丝状体移植后第14天洗去贝壳表面的多余丝状体,并更换培养液。然后,每组随机选取8个贝壳,每个贝壳在解剖镜下计数5个视野(2.5×10)内的藻落个数,取其平均值,根据视野面积计算出单位面积内的藻落个数,即初始藻落密度。 1.2.2 壳生长及壳分散量测定 各组贝壳丝状体培养至50 d,将贝壳丝状体移至29 ℃,光密度升至30 μmol photons/(m2·s)(8L∶16D),每7天更换一次氮∶磷=1∶10的灭菌海水,促进贝壳丝状体成熟。培养至85 d左右,贝壳丝状体已经成熟,将单个贝壳放入200 mL烧杯,加入50 mL培养液充气培养,温度降至(25±1) ℃,促进壳孢子放散。 将50 mL壳孢子水倒入直径为9 cm的培养皿内,在倒置显微镜下,统计40个视野(10×10)内的壳孢子数,取其平均值,根据视野面积与培养皿的底面积,计算出每个培养皿内的壳孢子数,即单个贝壳的壳孢子日放散量。每个贝壳在壳孢子开始放散后连续计数3 d,其总和为该贝壳的总壳孢子放散量。每组贝壳全部计数,取其平均值,为该组的平均放散量。 1.2.3 初始藻落密度的检测 3个品系的自由丝状体分别以50,100,200,350和500 mg/m2的移植量移植到贝壳上,各组贝壳丝状体在移植后第14天统计初始藻落密度,而后转移至20 ℃, 10 μmol photons/(m2·s)(14L∶10D)条件下培养,每7天更换一次培养液,并分别于移植后第25天,35天,45天拍照和记录贝壳丝状体的生长状况。贝壳丝状体的促熟与壳孢子放散量的计数同于1.2.2。 1.2.4 培养条件的影响 各实验组的移植量均为100 mg/m2,培养至14天,洗去贝壳表面多余的自由丝状体后,分别置于10,30,50 μmol photons/(m2·s)(14L∶10D)不同光密度条件下培养,培养温度均为20 ℃,每7天更换一次培养液并拍照,促熟和壳孢子放散量计数同于1.2.2。 1.2.5