基因工程药物的研究与应用.docxVIP

基因工程药物的研究与应用 1953年，两位科学家提出了dna双螺旋理论，为推动科学研究体系的形成奠定了理论基础。70年代, 发展的重组DNA技术、单克隆抗体技术使生物制药进入一个崭新的时代———基因工程制药。1982年, 美国Eli Lilly公司首先将重组胰岛素投放市场, 标志着世界第一个基因工程药物的诞生。据统计, 到2004年2月, 美国FDA批准的基因重组蛋白质药物共有64种, 目前还有几千种基因工程药物处于临床研究和实验室研究阶段。基因工程制药产业已成为最活跃、进展最快的产业之一, 产生了巨大的社会效益和经济效益。 1 有组织的细胞 基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术, 是将目的基因和载体在体外进行剪切、组合和拼接, 然后通过载体转入受体细胞 (微生物、植物或植物细胞、动物或动物细胞) , 使目的基因在细胞中表达, 产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。自20世纪70年代基因工程诞生以来, 最先应用且目前最为活跃的是在医药领域, 尤其在新药的研究、开发和生产中得到日益广泛的应用。 2 基因污染的预防 基因工程药物是先确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质, 然后将控制该蛋白质合成过程的基因取出来, 经过一系列基因操作, 最后将该基因放入可以大量生产的受体细胞中去, 在受体细胞不断繁殖过程中, 大规模生产具有预防和治疗这些疾病的药用蛋白质。利用基因工程技术生产药物的优点是: (1) 大量生产过去难以获得的生理活性物质和多肽, 为临床应用提供有力保障; (2) 发现、挖掘更多的内源性生理活性物质; (3) 对内源生理活性物质的不足之处进行改造和去除; (4) 可获得新型化合物, 扩大药物筛选来源。 3 3抗癫痫药技术路径 3.1 细菌细胞生产重组药物蛋白 基因工程细菌发酵制药是指在人工条件下, 培养通过基因工程构建的细菌细胞, 生产重组药物蛋白, 如胰岛素、干扰素等。利用基因工程菌表达药物蛋白具有经济、简单和易操作的优点, 但是在开发一些大分子量、结构复杂的功能蛋白质时, 细菌通常不能满足蛋白表达的需要。 3.2 胞培养构成药质 基因工程动物细胞培养制药是指在人工条件下, 高密度大量培养通过基因工程构建的动物细胞, 生产重组药物蛋白, 如病毒疫苗、抗原、抗体、免疫调节剂、重组激素以及生长因子等。该技术目前已成为当前大规模制备生物技术药物的主要方法, 它可以获得上千克甚至上吨的产物, 以满足药物的需求。第一个由基因工程动物细胞培养生产的药用蛋白是溶血栓药物组织型纤溶酶原激活剂 (t PA) , 目前t PA已商品化。和基因工程细菌发酵制药相比, 它具有一定的优势: (1) 能生产大分子、结构复杂的蛋白, 如凝血因子Ⅷ、促红细胞生成素 (EPO) 等; (2) 生产清洁, 整个生产过程不会对环境造成污染, 因为用于细胞培养及后期产品纯化所需的物质没有任何对环境造成危害的有毒物质; (3) 规模较小, 与传统的制药工业相比, 动物细胞培养的规模均较小, 因为用于诊断和治疗的药物一般只需很小剂量, 大概在微克级/人 (如EPO、白介素、干扰素等) ; (4) 纯化简单、方便, 由于动物细胞表达的产物是分泌型的, 而且动物细胞培养所需培养基成分较单一, 尤其是使用无血清培养基的时候; (5) 产品安全, 使用基因工程细胞生产药物蛋白, 避免了动物的病原体传染, 产品质量易于控制; (6) 大大减少了实验动物用量。但是, 动物细胞娇嫩挑剔, 生长缓慢, 培养成本昂贵, 使得基因工程动物细胞培养制药受到一定的限制。 3.3 水调保鲜系统 转基因动物生物反应器制药受到普遍重视的方案就是转基因动物乳腺生物反应器制药, 它是一种利用基因工程技术将目的基因与奶蛋白基因启动子构建成新的重组基因, 然后将该重组基因转入动物细胞或受精卵基因组中并发育成转基因动物, 发育成熟后在其乳腺中分泌出重组蛋白, 这些重组蛋白可开发成重组药物的高新技术。乳腺生物反应器生产基因工程药物的基本方法是:将药用蛋白质基因连接到乳汁蛋白质基因的调节元件下游, 然后将连接产物显微注射到哺乳动物受精卵或胚胎干细胞, 当转基因胚胎长成个体后, 在泌乳期药用蛋白质基因表达, 从动物乳汁可获得基因工程药物。通过该技术获得的经纯化的人抗凝血酶III蛋白是在我国首次利用乳腺生物反应器生产的抗凝血酶III蛋白纯品。人抗凝血酶Ⅲ是一种人血液中重要的抗凝血因子, 但是, 作为药物很难从人血中提取该酶, 而且由于该酶分子结构复杂, 利用微生物发酵系统往往不能表达出这种酶或者表达出的重组蛋白活性丧失, 而利用哺乳动物细胞培养体系则成本太高, 产量也较低, 无法满足该药的临床需求。20世纪80年代中后期发展起来的转基因动物乳腺生物反应器体系则为生产这些分子结构复杂而且临床需求