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针刺天枢对肠运动功能的调节作用 功能性肠病是临床上常见的肠道疾病之一。障碍是功能性肠病的重要特征之一。功能腹泻主要表现为肠运动的加速，而功能性便秘主要与肠道的缓慢速度有关。临床实践证明针刺天枢对功能性便秘、功能性腹泻均有较好的疗效。目前对于针刺天枢治疗功能性便秘和功能性腹泻的机制尚未清晰。本实验从肠运动的角度,分别观察针刺天枢对正常大鼠、便秘模型及腹泻模型大鼠肠运动的作用。由于腹泻和便秘的动力障碍的肠段分别在空肠和结肠,故重点观察针刺天枢对腹泻模型空肠和便秘模型结肠运动的作用,探讨针刺治疗功能肠病动力异常的双向调节机制。 1 试验对象和方法 1.1 周适应性饲养 SD(Sprague-Dawley)大鼠,60只,雄性,体重250~300 g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证SCXK(京)2009-0017,到实验室进行1周适应性饲养。大鼠随机分为正常、便秘模型和腹泻模型3组,每组20只。 1.2 化学试剂：国药县，国药县 乌拉坦(氨甲酸乙酸),批号国药集团化学试剂有限公司。番泻叶,购自中国中医科学院针灸医院,产品批号:1101047,产地广东。 1.3 干预运动换能器致上海某市 Powerlab 8/20数据采集系统(ML870,埃德仪器国际贸易上海有限公司);Quad Bridge Amp桥式放大器(ML224,埃德仪器国际贸易上海有限公司);胃肠运动换能器(WS100,北京新航兴业科贸有限公司);旋转蒸发仪(RE-2000,上海洪旋实验仪器有限公司);动物恒温系统(ALC-HTP,上海奥尔科特生物科技有限公司);恒温干燥箱(HG71-A,北京试验设备厂);华佗牌针灸针(Ф0.35×13 mm,苏州医疗用品厂有限公司);安全套天然乳胶光面型(广橡企业集团有限公司双一乳胶厂);聚乙烯导管(即PE管,外径0.94 mm,内径0.51 mm,北京踏锦科技有限公司)。 1.4 生药/ml制备 腹泻模型制作,采用番泻叶90 g,6倍量清水浸泡30 min,煎煮10 min后,经纱布过滤,在50℃下,滤液通过旋转蒸发仪,减压浓缩至300 mL,即得到0.3g生药/mL药液,-20℃冰箱内保存。用时水浴加温至25℃,按10 mL/kg的剂量灌胃,1次/d,连续灌胃2天以上。便秘模型制作,采用0℃生理盐水,按10 mL/kg的剂量灌胃,1次/d,连续灌胃5 d以上。 1.4.1 载体的设置与麻醉状态的观察 1)水囊的制作:将安全套套在PE管上,用线缠绕安全套的下端,制作直径约为0.5cm、长度约为0.6 cm的水囊,囊内充满纯净水,排空囊和导管内的空气,导管通过医用三通阀与胃肠运动换能器相连。2)仪器的设置:Chart记录系统参数设置:采样频率为1kHz,桥式放大通道低通滤波10Hz,数字滤波低通1Hz。实验前将胃肠换能器中充满纯净水,医用三通阀开到通大气状态,设备调零。3)动物麻醉:10%乌拉坦溶液,1~1.2 g/kg,腹腔麻醉。麻醉状态:用有齿镊子给下肢疼痛刺激,无疼痛反射,同时角膜反射存在,行针过程中,若出现下肢收缩,适量补充麻醉,以维持动物处于平稳的麻醉状态。实验过程中大鼠的体温维持在39℃左右。 1.4.2 防肠针刺操作 1)水囊放置。空肠水囊放置:大鼠仰卧,腹正中线切口,在幽门下20 cm的空肠处,做一与血管走向平行的小切口,将水囊放到切口上游约1.5 cm处,将切口用缝合线做荷包缝合,水囊放置完,缝合腹正中线切口。远端结肠水囊放置:从肛门插入水囊,深度到肛门上5~6 cm,用医用胶布将PE管固定于大鼠尾部。2)压力调节:将约0.1 mL的纯净水注入空肠内的水囊,至水囊内的基础压力为100 cm H2O,结肠内水囊的压力调节同空肠。水囊压力调整后,大鼠休整30~60 min,以肠运动信号平稳为度。3)针刺操作:天枢穴(ST25)定位相当于脐中,旁开0.5 cm,直刺0.5 cm。选取单侧天枢,穴区备毛,用记号笔标记腧穴的位置。将针灸针刺入腧穴内,深度0.5 cm。手动行针,平补平泻,120次/min,捻转行针1 min。 2 数据统计分析:基于chin7软件的分析 对肠运动分析的指标为收缩波的频率(次/min)和波幅(cm H2O),运用Chart7软件对图形进行数据分析。将针刺后60s的均值与针刺前基础值比较,使用SPSS Statistics 19.0统计软件进行数据处理,采用配对t检验,计量资料以均数±标准误表示。 3 结果 3.1 腹泻模型的验证 1)腹泻模型的评价:造模连续两天灌胃,大鼠出现精神倦怠、饮食减少、懒动、拱背、大便稀(见图1 a)等症状,稀便率为49.50%(稀便率=稀便粒数/总便粒数×100%)。表明大鼠腹泻模型成功。2)便秘模型的评价:灌胃后3 h内由于急性应激造成糊