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一测多评法测定黄柏中5种生物碱类成分 黄鼠尾是广州植物的黄皮树。它对加热和干燥也很有效。它具有清热除湿、清火除蒸发、解毒和艾酒疗法的作用。 其主要成分有小檗碱、黄柏碱、木兰花碱、巴马汀、药根碱等生物碱类, 其中含有量最高的为小檗碱［2-4］。现代药理研究表明, 盐酸小檗碱具有抗炎, 降血压, 降血糖和免疫调节等作用, 黄柏碱与降压作用有关, 而巴马汀、药根碱为抗病原微生物的有效成分［5-6］。2010年版 《中国药典》以小檗碱和黄柏碱的量作为黄柏质量控制指标, 尚不能全面反应黄柏的质量。目前, 虽有文献报道, 采用HPLC法同时测定黄柏中多种生物碱的量［7-8］, 但需要多种对照品, 限制了实际工作中的应用。 本实验以小檗碱为参照物, 得出黄柏碱、木兰花碱、药根碱、巴马汀与小檗碱之间的相对校正因子 ( F) , 同时测定了黄柏中木兰花碱、黄柏碱、 药根碱、巴马汀、小檗碱的量, 建立一测多评法 ( QAMS)［9-17］, 从而降低检测成本和时间, 提高方法的实用性。 1 试剂和仪器 Agilent 1200高效液相系统, Shimadzu LC- 20AT高效液相系统, FE20梅特勒-托利多p H计, Sartorius BP211D电子分析天平, KQ-300E超声仪 ( 40 k W) , 乙腈、甲醇为色谱纯, 水为超纯水, 其余试剂均为分析纯。 木兰花碱 ( Must) 、 盐酸黄柏碱 ( Must 、盐酸药根碱 ( Must 、 盐酸巴马汀 ( Must) 和盐酸小檗碱 ( Must-111212110) 均购自成都曼斯特生物科技有限公司, 纯度为98% 。黄柏样品1 ~ 3号购自广西, 4 ~ 7号购自贵阳, 8 ~ 9号购自湖北, 10号购自湖南, 11 ~ 30号购自四川荥经、青城山、都江堰、彭州、泸州等地药材市场和不同的饮片公司。 经本校生药室教研室卢先明教授鉴定为黄皮树Phellodendron chinense Schneid. 的干燥树皮。 2 标准曲线的制备 2. 1一测多评方法学考察 2. 1. 1色谱条件Phenomenex Luna C18色谱柱 ( 4. 6 mm × 250 mm, 5 μm) , Thermo C18( 4. 6 mm × 250 mm, 5 μm ) , Diamonsil C18( 2) ( 4. 6 mm × 250 mm, 5 μm ) 。 柱温30 ℃ , 体积流量1 m L / min, 检测波长280 nm, 流动相A为乙腈-0. 05 mol / L磷酸二氢钾 ( KH2PO4) ( 45 ∶ 55) ( 每100 m L中加入0. 4 g十二烷基硫酸钠, 调节p H至4. 8 ) , 流动相B为乙腈-0. 05 mol / L KH2PO4( 55 ∶ 45) ( 每100 m L中加入0. 4 g十二烷基硫酸钠, 调节p H至4. 5) , 梯度洗脱, 0 ~ 12 min ( 0 B) , 12 ~ 18 min ( 0 ~ 100% B ) , 18 ~ 40 min ( 100% B) , 40 ~ 42 min ( 100% ~ 0 B) , 42 ~ 48 min ( 0 B ) 。上述色谱条件下, 各组分分离度良好, 色谱图见图1。 2. 1. 2对照品溶液的制备取木兰花碱、盐酸黄柏碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱5种生物碱, 精密称定10. 24、9. 8、9. 09、10. 92、14. 42 mg, 分别置于10 m L量瓶中, 用甲醇定容至刻度。再稀释至适当质量浓度。精密移取稀释后的5个对照品溶液适量配为混合对照品溶液。将上述溶液保存于4 ℃冰箱中备用。 2. 1. 3供试品溶液的制备取黄柏药材粉末 ( 过4号筛) 约0. 5 g, 精密称定, 置于100 m L锥形瓶, 精密加入盐酸-甲醇 ( 1 ∶ 100) 的混合液40 m L, 称定质量, 超声30 min, 冷却后加盐酸-甲醇 ( 1 ∶ 100) 的混合液补足失质量, 过滤, 取续滤液过0. 45 μm滤膜, 5 μL进样。 2. 1. 4线性范围考察精密吸取上述混合对照品溶液40、20、10、8、6、4、2、1 μL, 进样分析, 每个质量浓度进样3次, 取平均值。以进样量对峰面积积分值进行回归处理, 得小檗碱、木兰花碱、 黄柏碱、药根碱、巴马汀的标准曲线见表1。 2. 1. 5校正因子计算以小檗碱为内标, 计算小檗碱对木兰花碱、黄柏碱、药根碱、巴马汀的校正因子, 见表2。 2. 1. 6精密度试验精密吸取混合对照品溶液5 μL于同一天内连续进样5次, 记录木兰花碱、黄柏碱、药根碱、