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盐酸美金刚胺及其前药脂水分配系数的测定 盐酸美金刚胺（mh）是第一个抗癫痫药物，在阿尔茨海默病和血管性迷宫性血管性疾病方面发挥着显著作用。未经批准，它被允许用于中重度ad的治疗。为增加盐酸美金刚胺的脂溶性, 提高其通过血脑屏障 (BBB) 的能力, 目前已设计并合成了盐酸美金刚胺前药 (PMH) , 其理化性质未见报道。从化学结构分析可能具有脑靶向性, 实际药理药效还处于处于基础研究阶段。现采用恒温摇瓶法测定MH及PMH脂水分配系数, 证明PMH比MH具有更高的脂溶性。推测其具有良好的透过BBB的能力, 可提高药物在脑内的浓度。 1 实验部分 1.1 计成都双港四合开中国 LC-10ATvp液相色谱仪系统 (日本岛津) ;PHS-3C型酸度计 (成都方舟科技开发公司) ;盐酸美金刚胺 (MH, 含量99.5%) 及盐酸美金刚胺前药PMH (含量99.1%) (四川大学化学学院) ;盐酸金刚烷胺 (市售) ;水为重蒸水, 其余试剂均为化学纯。 1.2 方法和结果 1.2.1 样品背景和检测方法 色谱柱为Luna C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm) ;流动相为甲醇-水-三乙胺 (70:30:0.5, 磷酸调pH7) ;流速为1.0 ml·min-1;检测波长为225 nm。理论板数按盐酸美金刚胺衍生物峰计算应不低于3×103。盐酸美金刚胺衍生物峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。 1.2.2 线性相关法 取盐酸美金刚胺适量, 精密称定, 用三氯甲烷制成1 mg·ml-1的溶液;取该溶液适量, 与磷酸盐缓冲溶液 (pH7.8～8.0) 混合, 置恒温振荡仪 (37℃、281 r·min-1) 上振荡16 h后, 4℃避光静置2.5 h。分取脂水两相溶液, 离心, 各取1 ml, 用甲醇稀释至50 ml;各取10 μl, 加10 μl内标溶液 (20 μg·ml-1盐酸金刚烷胺甲醇溶液) , 60℃水浴中挥干, 加衍生化试剂 (苯甲酰氯丙酮溶液) 100 μl和三乙胺10 μl, 混匀, 4℃下避光放置30 min, 60℃水浴中挥干, 加100 μl流动相溶解后, 取20 μl进样测定。采用内标标准曲线法计算脂水两相中盐酸美金刚胺的浓度, 以两相浓度比为盐酸美金刚胺的脂水分配系数。 1.2.3 脂相进样测定 按“1.2.2”项下方法配制PMH溶液, 取水相溶液20 μl直接进样测定;取脂相溶液1 ml, 用甲醇稀释至50 ml, 取10 μl, 于60℃水浴中挥干, 用100 μl流动相溶解, 取20 μl直接进样测定;采用外标标准曲线法计算PMH脂水两相中的浓度, 以两相浓度比为PMH的脂水分配系数。 1.2.4 刚胺长期进样回归方程 分别用相互饱和的脂相和水相配制一系列浓度的MH溶液。按“1.2.2”项下方法测定, 以MH与内标的峰面积比对浓度进行线性回归。两相中盐酸美金刚胺0.01～6.37 mg·ml-1与峰面积的线性关系良好, 得回归方程分别为:Y水相=0.869X+0.029 (r=0.9995) 和Y脂相=0.964X+0.089 (r=0.9996) 。PMH按上述操作直接进样, 以PMH的峰面积对浓度进行线性回归。PMH水相溶液0.39～50.50 μg·ml-1与峰面积的线性关系良好 (r=0.9996) , 回归方程为:Y=1.551×103X+4.755×103。 1.2.5 mh及pmh的脂水分配系数 按“1.2.1”项下方法, 测定脂水两相的体积比分别为5:1、3:1、1:1、1:3、1:5时MH及PMH的脂水分配系数。经考察, 两种药物在脂水两相的体积比为1:1时均测得最大脂水分配系数。因此, 确定测定脂水分配系数的两相体积比为1:1。 1.2.6 mh和pmh的脂水分配系数测定 取两相体积比为1:1, 按“1.2.2”项下方法试验, 分别测定经恒温振荡1、3、5、12、16、24 h后MH与PMH的脂水分配系数。经考察, 药物两相平衡所需时间均为16 h。 取两相体积比为1:1, 按“1.2.2”项下方法试验, 分别在25℃、37℃下恒温振荡达平衡后测定MH与PMH的脂水分配系数。经考察, 振荡温度对其脂水分配系数的影响较小。 1.2.7 脂水分配系数 分别精密称取MH与PMH适量, 照“1.2.2”项下方法测定其脂水分配系数并进行比较。 结果, PMH的脂水分配系数为277.05, MH的脂水分配系数为2.09。试验表明, PMH的脂水分配系数明显大于MH的脂水分配系数, 显示前者具有较高的脂溶性。 2 脂水两相溶剂的选择 由此盐酸美金刚胺 (MH) 无紫外吸收, 采用常规HPLC-UV法无法检测, 因此, 须建立柱前衍生化法。PMH有较强的紫外吸收, 可用HPLC-UV法直接测定。以