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注射用还原型谷胱甘肽配伍稳定性研究 血液中的原生动物糖苷（gsh）是由谷氨酸、甘氨酸和l-半胱氨酸组成的小三醇酸。它对人体生命的正常功能起着重要作用，如激活氧化还原系统、激活氨基酸酶、解毒等。临床主要用于酒精及某些药物 (化疗药、抗肿瘤药、抗结核药等) 导致中毒的辅助治疗。为了临床安全、有效、经济、适当地使用还原型谷胱甘肽, 本文参考有关文献。并按中国药典2005年版二部规定的方法, 建立了HPLC法测定注射用还原型谷胱甘肽及有关物质氧化型谷胱甘肽 (GSSG) 的含量, 考察了不同厂家生产的注射用还原型谷胱甘肽在2种溶媒中的稳定性。 1 还原型谷胱甘肽 Agilent1100高效液相色谱仪 (美国Agilent公司) ;ZWF-J6型激光注射液微粒分析仪 (天津天河医疗仪器研制中心) ;pHS-3B酸度计 (上海雷磁仪器厂) ;梅勒特万分之一电子天平 (瑞士Mettler公司) 。 还原型谷胱甘肽对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号:130896, 按面积归一化法计算得含量为99.11%) ;氧化型谷胱甘肽对照品 (Sigma公司, 批号 按面积归一化法计算得含量为98.02%) ;3种不同厂家生产的注射用还原型谷胱甘肽 (A药:中国**制药有限公司, 规格:0.6 g·支-1, 批号:061201;B药:由***国家进口, 规格:0.6 g·支-1, 批号:6062;C药中国**制药有限公司, 规格:0.3 g·支-1, 批号:200605263) ;5%葡萄糖注射液 (广东大冢制药有限公司, 规格:100 mL·瓶-1, 批号:081005) ;0.9%氯化钠注射液 (广东大冢制药有限公司, 规格:100 mL·瓶-1, 批号:081103) ;甲醇 (美国TEDIA公司, 色谱纯) ;辛烷基磺酸钠 (迪马科技有限公司, 色谱纯) ;其他试剂为分析纯;水为娃哈哈纯净水。 2 方法和结果 2.1 支的配制 模拟临床配制方法进行配制。取A药、B药各1支, C药2支分别加入到100 mL的 5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液溶解, 每个配伍液平行配制5份, 置于室温下。另取5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液作为空白对照。 2.2 还原型谷胱甘肽与2种注射液配伍后溶液状态观察 取“2.1”项下的溶液, 置于室温 (25 ℃) 下, 分别于5、10、15、30、45、60、90、120、180和240 min观察溶液外观, 结果注射用还原型谷胱甘肽与2种注射液配伍后呈无色澄明溶液, 随着时间的延长未见有颜色变化、沉淀、气泡等现象。 2.3 ph值的测定 取“2.1”项下的溶液, 置于室温 (25 ℃) 下, 并分别于5、10、15、30、45、60、90、120、180和240 min测定pH值, 结果在4 h内pH的变化不大, 符合临床使用要求。 2.4 静脉用注射液液相液 按中国药典2005年版二部附录 ⅨC依法进行测定,中国药典2005年版规定:标示量为100 mL或以上的静脉用注射液, 除另有规定外, 每1 mL中含有≥10 μm的微粒不得超过25粒, 含≥25 μm的微粒不得超过3粒。从实验结果可以得出, 进口与国产制剂配伍液在0～4 h内微粒情况变化不大, 均符合中国药典2005年版二部的要求。 2.5 在测定了各溶液的含量 2.5.1 酸二氢钠溶液l-1辛烷基磺酸钠 安捷伦Zorbax Extend-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm) 色谱柱;流动相:0.01 mol·L-1磷酸二氢钠溶液 (含5 mmol· L-1辛烷基磺酸钠, 用磷酸调节pH至3.5) -甲醇 (98∶2,v/v) ;检测波长:210 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:室温;进样量:10 μL。在此色谱条件下, 氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽与其他杂质峰达到基线分离, 保留时间分别为3.5 min和5.0 min, 理论塔板数按还原型谷胱甘肽峰计算≥6 000, 见图1。 2.5.2 对照品溶液的制备 精密称取还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽适量, 加水制成含还原型谷胱甘肽600 μg·mL-1, 氧化型谷胱甘肽300 μg·mL-1的溶液, 作为对照品溶液。 2.5.3 还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的还原酶活性评定 精密移取对照品溶液适量, 依次稀释成还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的混合溶液, 还原型谷胱甘肽浓度分别为300、100、50、20、10 μg·mL-1, 氧化型谷胱甘肽浓度分别为150、50、25、10、5 μg·mL-1, 精密吸取上述对照品混合溶液各10 μL进样, 按外标法以峰面积 (Y) 对还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽浓度 (X) 进行线性回归, 得回归方程分别为