蚯蚓蛋白水解工艺研究.docxVIP

蚯蚓蛋白水解工艺研究 蠕虫属于环节动物门的细胞菌素类，是一种低无脊椎动物的环节动物。这是一个多功能的资源。不仅可以肥沃的土壤，而且可以净化环境，提供动物所需的蛋白质、氨基酸、维生素、矿物和其他养分，以及溶缩酶、过氧化氢酶、肿瘤成分和溶血素等生物活性成分。作为重要的腐食食物链的土壤动物,蚯蚓在农业有机废弃物处理具有重要意义,并在孙振钧,胡锋,卓少明等努力下已经实现了从理论到实际运用的突破。但如何提高产物蚯蚓的经济效益将其资源化利用已成为急需要解决的问题。蚯蚓蛋白制作成的氨基酸原料有广泛的用途。蚯蚓消化道有10多种蛋白水解酶,如蚯蚓纤溶酶等,这些蛋白酶类对蛋白质有较强的水解活性,可使蛋白质发生水解。因此,利用蚯蚓自身水解酶酶解蚯蚓蛋白质,是获取较高营养价值蚯蚓水解液最有效的方法之一。利用酶解工艺将蚯蚓蛋白制作成氨基酸原料,可用于复合蚯蚓营养保健液、氨基酸叶面肥、氨基酸农药以及饲料添加剂的生产。 当前酶的应用研究发展迅速,但是关于外源酸性蛋白酶对于蚯蚓蛋白酶解的影响研究报道不多。笔者探讨了三种外源酶对蚯蚓粗蛋白下脚料水解的影响,研究了在加酶和不加酶的条件下鲜蚯蚓浆的氨基酸浓度的变化,并通过回归分析建立了回归方程模型,进一步提高蚯蚓蛋白水解工艺提供参考。 1 材料和方法 1.1 试验时间和地点 室内试验在山东农业大学土壤生化实验室进行。 1.2 蛋白下脚料 供试蚯蚓,赤子爱胜蚓(Eisenia fetida),水分含量83%,蛋白质含量35%,由德州大齐牧业有限公司提供 蚯蚓粗蛋白下脚料,蛋白质含量16%,含水量≤10%,p H≈6德州大齐牧业有限公司提供。 外源蛋白酶,537酸性蛋白酶(30000 U/g),1398中性蛋白酶(30000 U/g),碱性蛋白酶(100000 U/g)购于北京东华强盛生物技术有限公司,冰箱4℃保存。 1.3 测试方法 1.3.1 外源蛋白酶的影响 蚯蚓浆的制备:将蚯蚓放于铺有一层已浸湿的滤纸的20 cm×30 cm×40 cm塑料盘中,在其上部覆盖干燥的滤纸,单层纱布封口,放于30℃恒温箱中黑暗脱粪培养24 h,取出蚯蚓,洗净,电动匀浆机匀浆后,待用。 外源蛋白酶对蚯蚓粗蛋白下脚料的作用:取等质量的蚯蚓粗蛋白下脚料,按酶活力10000 U/g加入中性蛋白酶、酸性蛋白酶与碱性蛋白酶酶解5h,未加外源蛋白酶的样品为对照,底物浓度1:2,p H7.0,温度50℃。 不同水解时间比较:取匀浆放置半小时后蚯蚓浆50 ml,加入537酸性蛋白酶900 U/g,不加酶为对照,在p H7.0、底物浓度1:2、温度25℃下放置1 h,然后置于温度50℃下水解,时间为2,3,4,6,8 h,不加酶的处理水解时间为1,3,5,7,8 h。 1.3.2 氨基态氮、全氮的测定 水解反应结束后,水解液100℃沸水浴加热灭活10 min,经低速(3500 rpm)、低温(4℃)离心10 min,取上清液分装、密封,测定其水解率,氨基态氮含量。 氨基态氮采用双指示剂滴定法,全氮采用凯式定氮法。 水解度%(DH)=(上清夜中氨基态氮含量/原料全氮含量)×100% 1.3.3 统计分析 2 结果与分析 2.1 酸性蛋白酶水解率高 蚯蚓粗蛋白下脚料是混有蚯蚓粪的蚯蚓残体,在蚯蚓养殖中一般作为下脚料与蚯蚓粪一起作为有机肥处理。在p H7.0,温度50℃下酶解5 h,采用双指示剂滴定法氨基态氮,测定了三种蛋白酶对蚯蚓粗蛋白水解的影响,结果列于表1。 表1的结果表明加入的三种蛋白酶都能提高水解速率。水解液的氨基态氮含量表示水解液中的实际氨基态氮数量,含量越高,水解液的利用价值越大。水解度则表示已经水解的蛋白占原料中总蛋白数量的%,水解度越高说明原料中蛋白水解越彻底,该水解工艺的应用潜力越大。蚯蚓粗蛋白中蛋白含量只有16%左右,而杂质含量高。在不加外源酶只依靠自身酶水解的情况下,氨基态氮含量只有0.084%,蛋白水解度3.19%,酶解效率很低,基本没有利用价值,只能作为废弃物处理。加入蛋白酶后,水解液的氨基态氮含量与水解度都明显提高。中性蛋白酶处理的水解度提高到对照处理的2.57倍,碱性蛋白酶处理的水解度提高到对照处理的3.40倍,酸性蛋白酶效果最好,水解液中氨基态氮含量高达1.571%,水解度高达59.94%,是对照的18.79倍。这与原材料蚯蚓蛋白下脚料自身酸性有一定关系,酸性蛋白酶的适宜的p H在4.5~5.5,蚯蚓粗蛋白的p H是5.0,处于酸性蛋白酶的适宜p H范围内,所以效率比较高。酸性蛋白酶的水解率与空白处理比较,差异极显著,提高效果最明显。极有利用研究价值,为蚯蚓粗蛋白下脚料的利用提供了新途径。 2.2 酸性酶对甘蔗水的分解影响 2.2.1 加酶处理对鲜关于说的影响 蚯蚓体内富含各种蛋白质,其总量达35%。蚯蚓蛋白自溶酶主要是胞