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液相色谱-紫外-质谱联用技术对绿茶、茉莉花茶、苦丁茶和人参茶中茶多酚成分的定性定量分析 茶多酚是一种也被称为“轻茶”的茶叶提取物。这是茶叶中多羟基酚类化合物的总称。其主要成分为茶素类（黄烷醇）、黄酮类、黄酮醇、花青素、酚酸、收缩酚酸和一体化酚类。其中，儿茶素类化合物是茶多酚的主要成分，占茶多酚总数的65%80%。茶多酚是茶叶中的主要活性成分,占茶叶干重的18%～36%。研究证实,茶多酚具有多种保健功能和药理效应,如抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、降血脂、防治动脉硬化等。不同种类的茶中茶多酚的成分及含量是有差异的。本实验采用液相色谱-质谱联用技术分析绿茶、茉莉花茶、苦丁茶和人参茶中的茶多酚成分,并对其含量进行测定。 1 材料和方法 1.1 高效液相色谱法 绿茶、茉莉花茶、苦丁茶、人参茶市购。 茶多酚混合标样(8种)Sigma公司,包括(-)-没食子儿茶素(GC)、(-)-表没食子儿茶素(EGC)、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)、(-)-表儿茶素(EC)、(-)-没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、(-)-表没食子儿茶素甲氧基没食子酸酯、(-)-表儿茶素没食子酸酯(ECG)和(-)-儿茶素没食子酸酯(CG)。准确称量后用水溶解,使其总质量体积分数为1.88g/L。 LTQ型液相色谱-质谱联用仪(线性离子阱型液相色谱-质谱联用仪)美国赛默飞世尔公司;TC-C18液相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)Agilent公司;KQ-300型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司。 1.2 色谱-质谱条件 电喷雾电离源(ESI);正离子检测模式;N2为雾化气;He为碰撞气;TC-C18液相色谱柱;流动相CH3OH(0.1%HCOOH)-H2O(0.1%HCOOH),初始为甲醇相12%,30min内梯度变化为甲醇相50%,并保持10min,流速1000μl/min;进样量25μl;紫外检测器;检测波长278nm。 1.3 超声提取法g 绿茶、茉莉花茶、苦丁茶和人参茶各称量0.3g,置于10ml试管中,加入5ml热水,超声提取5min,5000r/min离心2min,取上清液上机测定。 2 结果与分析 2.1 绿茶和茉莉花茶中总组分的检测 采用液相色谱-紫外-质谱/质谱联用技术分别测定绿茶、茉莉花茶、苦丁茶和人参茶提取液,其液相色谱-紫外测定结果示于图1。由图1可见,绿茶、茉莉花茶、苦丁茶中提取出了多个组分,并且绿茶和茉莉花茶的组分比较相似,苦丁茶的组分与它们差别较大,人参茶中未提取出可检测到的组分。通过观察每个紫外峰对应的质谱信号,可以确认绿茶中含有5种儿茶素、茉莉花茶中含有7种儿茶素、苦丁茶和人参茶中未检测到儿茶素类组分(表1)。儿茶素类化合物的基本结构为2-连(或邻)苯酚基苯并吡喃衍生物,正是因为这种结构中具有连(或邻)苯酚基,其抗氧化活性高于一般非酚类或单酚羟基类抗氧化剂。该类化合物在质谱碰撞能量的作用下均会发生吡喃环断裂,形成m/z139、151等碎片,为化合物的定性提供有力的证据。 2.2 食子儿茶素提取自生检测 由于提取物中成分复杂,故在定量分析中采用质谱的选择离子检测模式。分别以m/z291、307、443、459、473为定量离子,对(-)-表儿茶素(EC)、(-)-没食子儿茶素(GC)、(-)-表没食子儿茶素(EGC)、(-)-表儿茶素没食子酸酯(ECG)、(-)-没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)和(-)-表没食子儿茶素甲氧基没食子酸酯进行定量测定,其离子流色谱图见图2。对照品的茶多酚总浓度为1.88g/L,通过面积比较法,初步确定绿茶中茶多酚的含量为2%、茉莉花茶中茶多酚的含量为4%。