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全蝎不同商品中总多糖含量测定 中药蝎子scorpio是蝎子科动物东亚蝎子的干燥身体。具有息风镇痉,通络止痛,攻毒散结的功效。临床用于肝风内动,痉挛抽搐,小儿惊风,中风口?,半身不遂,破伤风,风湿顽痹,偏正头痛,疮疡,瘰疬等症［1］。已有研究表明,动物药材中多含有多糖类成分［2］,但有关全蝎药材中的多糖成分分析未见报道。为有效控制全蝎药材的质量,本实验从药材市场中收集了10 批全蝎药材商品,乙醚脱脂、水提取后、酸水解,苯酚- 硫酸显色,以葡萄糖对照,采用分光光度法测定其总多糖含量。以期为全蝎药材商品的质量控制提供依据。 1 仪器和试剂盒 1.1 超声清洗器 UV - 3010 分光光度计( 上海分析仪器总厂) ;AS5150A超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司) ;AR2140 电子分析天平( ACCULAB) 。 1.2 drwell药品化学品检所图1 1. 2. 1对照品D - 无水葡萄糖( D - Glucose anhy-drous) 批号: 110833 - 200302,纯度99. 8% ,中国药品生物制品检所。 1. 2. 2显色剂的配制称取5 g冷却于冰箱中的重结晶苯酚粉末,加水溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为5%的苯酚溶液,放置冰箱备用。 1.3 实验材料 10 批全蝎药材商品来源及规格,详见表1。 2 方法和结果 2.1 标准曲线的制备 2. 1. 1供试品溶液的制备取于50 ℃ 恒温干燥的各全蝎药材粉末2 g ( 过40 目筛) ,精密称定。置索氏提取器中,加乙醚回流提取12 h,弃去乙醚,残渣,挥干乙醚,置圆底烧瓶中,加水50 mL,回流提取2 次,每次1. 5 h,合并两次提取液,浓缩至50 mL,加氯仿50 mL萃取3 次,取上清液置100 mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,置冰箱中备用。 2. 1. 2对照品溶液的配制取葡萄糖对照品约20 mg,精密称定,加水溶解,定容至50 mL的量瓶中,得到葡萄糖对照溶液,浓度为每1 mL含葡萄糖0. 4634 mg。 2. 1. 3最大吸收波长的测定分别精密量取葡萄糖对照品溶液及8#样品供试品溶液各1 mL于刻度试管中,加水1 mL,精密加入苯酚1. 0 mL,浓硫酸5. 0 mL混匀; 同法制备空白溶液,分别置沸水浴加热10 min,冷却,置分光光度计中,按《中华人民共和国药典》附录VA中紫外- 可见分光光度法［1］,于400 ~ 700 nm区间扫描,测得最大吸收波长分别为488 nm、487 nm。故选择488 nm作为测定波长。 2. 1. 4标准曲线的制备分别精密吸取葡萄糖对照品溶液0、40、80、100、160、200 μL,置刻度试管中,加水至1. 0 mL,分别精密加入5% 苯酚溶液1. 0 mL,混匀,迅速精密加入浓硫酸5. 0 mL摇匀,放置5 min,置沸水浴中加热15 min,冷却后,于分光光度计488 nm波长处测定吸收度,以第一份为空白对照,按2. 1. 3 项下测定方法,测得各葡萄糖对照品的吸收度,以葡萄糖的含量为横坐标,吸收度为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为A = 0. 0045C + 0. 0012( r = 0. 9998) ,线性范围为18. 54 ~92. 68 μg。 2. 1. 5样品含量测定精密吸取2. 1 项下中各供试品溶液1. 0 ~ 25 mL置具刻度试管中,分别精密加入5% 苯酚溶液1. 0 mL,浓硫酸5. 0 mL摇匀,放置5min,冷却至室温; 同法制备空白溶液,分别置沸水浴中加热15 min,冷却1 h,按2. 1. 3 项下测定方法,测定各供试品溶液的吸收度,依回归方程计算出各样品中以葡萄糖计的总多糖含量,结果详见表2。 2.2 全蟹多糖含量测定 2. 2. 1粗多糖供试液的制备精密称取于50 ℃ 恒温干燥的各全蝎药材样品粉末2 g( 过40 目筛) ,置索氏提取器中,加入乙醚50 mL,回流提取12 h,取出,挥干乙醚,将残渣置50 mL圆底烧瓶中,加入50 mL水,回流提取2 次,每次1. 5 h,合并两次水提液减压浓缩至50 mL,加三氯甲烷50 mL萃取3 次以除蛋白,取上层清液加无水乙醇使含醇量达到80%,沉淀,静置过夜,抽滤,沉淀用少量丙酮洗涤4 ~5 次,得到沉淀,干燥,即得全蝎药材的粗多糖。取该粗多糖粉约5 mg,精密称定,加水溶解,定容于10 mL量瓶中即得粗多糖供试液。 2. 2. 2最大吸收波长的测定精密吸取2. 2. 1 项下的8#样品的粗多糖供试液0. 5 mL,置10 mL具塞刻度试管中,加水至2. 0 mL,分别精密加入5% 苯酚溶液1. 0 mL,浓H2SO45. 0 mL,摇匀,放置5 min,冷却后置沸水浴中加热15 min,冷却后,按2. 1. 3