凡纳滨对虾养殖土池的微生物群落功能变化.docxVIP

凡纳滨对虾养殖土池的微生物群落功能变化 每年的5月至9月是中国南方的雨季。同时，也是一个减少、高温和台风的季节。风、风暴和台风登陆，导致大量降水，通常是降雨。强降雨经常对水产养殖产生重大影响。暴雨或大雨后,养殖池塘的水域环境发生巨大的变化,可能增加对虾发病及死亡的几率。目前国内有对养殖池塘微生物群落研究的相关报道,但针对台风、强降雨等恶劣天气对对虾养殖池塘环境影响的研究较少。本研究从微生物生态的角度出发,探讨了强降雨对虾池水体及底泥微生物群落的影响。 2009年7月中下旬,受强台风“莫拉菲”环流云系影响,广东省茂名市电白县出现大到暴雨天气,其累积降雨量高达316 mm。笔者于持续强降雨天气前后采集了广东省茂名市电白县凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)半集约化养殖土池的水样和泥样,研究了施用微生态制剂和未施用微生态制剂的虾池水体及底泥的异养菌、弧菌和芽孢杆菌的变化情况,并利用BIOLOG ECO微板对水体和底泥的微生物群落代谢变化进行了探讨。旨在了解台风、强降雨等恶劣天气对养殖环境微生物群落的影响及在此天气条件下微生态制剂的应用效果,并提出恶劣天气下养殖池塘应采取的应对措施,以期为实际生产中对养殖池塘环境进行科学、有效地调控提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 微生物制剂的使用 在广东省茂名市电白县冠利达科技生物养殖公司养殖场选取2个理化条件基本一致的半集约化凡纳滨对虾养殖土池,分别编号为1号和2号虾池。池塘面积为0.33 hm2,水深1.2~1.5 m,每池配叶轮式增氧机2台。1号虾池于2009年5月9日放苗,2号虾池5月15日放苗,放苗量均为75万尾/hm2。放苗前用茶麸、二氧化氯等消毒剂消毒水体。在养殖过程中,1号虾池从6月18日起每隔10~15 d施用芽孢杆菌(Bacillus sp.)(中国水产科学研究院南海水产研究所研制生产)用于调控水环境,根据虾池情况,不定期施用乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)(中国水产科学研究院南海水产研究所研制生产),2号虾池在养殖过程中未施用任何微生物制剂。整个养殖过程中,天气变化大,多次遭受强降雨、台风等恶劣天气,对养殖造成了较大的影响。 本研究选取强台风“莫拉菲”影响前后(2009年7月14日和2009年7月28日),分别采集2个虾池的水样和泥样进行监测分析。在这段时间内,1号虾池于7月14日和7月24日分别施加芽孢杆菌和乳酸菌制剂;2号虾池7月17日发现部分对虾出现黄鳃现象,在17日和19日少量施用水体消毒剂。强台风“莫拉菲”带来强降雨的时间为7月18日-22日,因为此段时间降雨量大,2个虾池均进行了排水处理,少量换水。 1.2 样品采集与分析 1.2.1 、温度和定量测量盐度 在虾池中分别采集池塘四周及中央的表层水样(水面以下0.5 m),再将各点水样混合均匀,取混合水样。现场采用PHB-1型便携式p H计测定p H值,Orion 810便携式溶氧仪测定溶解氧(DO),WYY-Ⅱ便携式折射盐度计测量盐度(表1)。 采集100 m L混合水样,保存在250 m L的无菌三角瓶中,样品低温保存,迅速带回实验室,立即进行处理。在水样中加入1%(V/V)吐温,摇床振荡30 min后,进行10倍稀释,分别取上述样品合适稀释度的0.1 m L稀释液在无菌条件下涂布于普通海水培养基2216E(5 g蛋白胨、1 g酵母浸膏、0.1 g磷酸高铁、18 g琼脂粉、1 000 m L陈海水)和弧菌选择性培养基TCBS(广东环凯微生物科技有限公司)平板。将稀释水样经80℃水浴20 min预处理,再在无菌条件下涂布于2216E平板,28℃倒置培养2 d和7 d后计数芽孢杆菌的数量。配制培养基时根据养殖水体的实际p H和盐度情况对培养基做相应调整。 1.2.2 低温保存时间 分别采集池塘四周及中央的表层泥样,再将各点样品混合均匀,保存于灭菌平皿中。所有样品低温保存迅速带回实验室,于4℃下保存待测定。 准确称取10 g泥样,溶于盛有玻璃珠和90 m L无菌水的三角瓶中,加入1%吐温,置于摇床中振荡30 min后,进行10倍稀释,分别取上述样品合适稀释度的0.1 m L稀释液涂布平板,方法同1.2.1。 1.2.3 biologec-pcr样品的制备 BIOLOGTM的ECO微板(Matrix Technologies Corporation)为96微孔板,含有3套31种不同碳源。将水样直接倾倒在无菌加样槽中,用八道移液器把水样加入BIOLOG ECO微板的微孔中,每孔150μL,每个水样重复3次。将泥样稀释1 000倍,接种于BIOLOG ECO微板,每个样品做3个重复。将加好样的BIOLOG ECO微板加盖,28℃恒温培养。培养过程中分别在0 h、24 h、48 h、72