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植物生长素及其极性运输的研究进展 近年来，由于植物酶和生物化学的发展，生长素与蛋白质、靶场及其功能机制、生长素反应基因等的结合取得了迅速发展。关于生长素及其极性运输在形态建成中的作用的研究开始得到了比以前远为详细的资料, 使得在分子和细胞水平上研究生长素的作用机理成为可能。 1 子牙的生物合成和代谢 1.1 水解酶基因检测 吲哚乙酸 (IAA) 的合成途径主要有二:一条是色胺 (TAM) 途径, 另一条是吲哚丙酮酸 (IpyA) 途径, 最后合成IAA;还有一条是由吲哚乙醛肟 (Indole-3-acetaldoxime) 经中间产物吲哚乙腈 (IAN) 合成IAA的系统 (图1) 。高等植物中都含有与上述合成系统有关的酶系, 如加入中间产物, 很快即转变成IAA。有人在植物中还发现了一种不以色氨酸为底物的吲哚乙酸合成途径。此外, 在根癌农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens) 和假单胞菌 (Pseudomonas savastanai) 中发现了一条在植物中没有的生长素合成途径, 它有两个有关的基因, 一个是iaaM基因, 编码色氨酸单加氧酶, 催化色氨酸转变成吲哚乙酰胺 (IAM) ;另一个是iaaH基因, 编码吲哚乙酰胺水解酶, 催化IAM生成IAA的反应。 转基因研究的结果表明, 高水平表达iaaH基因的转基因烟草和对照植株在形态上没有明显的不同, 因为植物体内没有显著水平的IAM。在植物离体组织培养中, 可以采用在培养基中加外源IAM的办法诱导IAA的合成。与上述相反, 在CaMV35S启动子的调控下, 高水平表达的iaaM基因的转基因烟草植株和对照植株在形态上有较为明显的不同。例如转基因烟草植株表现出强顶端优势、茎伸长、叶卷曲等典型的生长素过量表达的形态学特征。该转基因植株的新鲜叶组织中吲哚乙酰胺的含量为2.8 μg·g-1(FW) , 而野生型烟草植株中吲哚乙酰胺的含量很少, 几乎可以忽略不计。其IAA水平比对照植株之所以高10倍, 可能是由于部分IAM转变为IAA之故。但迄今对此种转变是由酶催化还是因化学变化所致, 还不清楚。 1.2 结合态的iaa 生长素的代谢包括生长素结合物 (conjugate) 的形成, 转化形成吲哚丁酸 (IBA) 和氧化分解等过程 (图2) 。生长素合成和代谢之间的平衡是特定细胞中游离态生长素水平主要决定因素。Bandurski等研究玉米种子发育和萌发结果表明, IAA-Glc和IAA-Inos在发育的种子中积累, 从胚乳转移至芽中后形成游离态IAA;Cooke等认为IAA代谢在胡萝卜体细胞中胚胎发生的建立起重要作用。 IAA结合物的形成主要通过以下两条途径:一是与蔗糖或肌醇形成结合物, 另一是与氨基酸、多肽或蛋白质形成结合物。结合态IAA的功能主要起IAA储藏和避免其被氧化分解的作用, 因而结合态IAA的形成是维持IAA活性水平的重要调节手段之一。Bandurski等采用组织培养、生长素过量表达的转基因植物和突变体的研究结果均支持结合态IAA具有储藏IAA功能并起调节游离IAA水平的作用的假说。此外, 有研究表明结合态IAA如IAA-Ala和IAA-Gly等不能通过极性运输在植物体内移动, 所有结合态的IAA在体内的移动是通过自由扩散而实现的。结合态生长素可以通过酶促反应而降解, 有关水解酶 (如豆类和胡萝卜中的IAA-Phe、IAA-Ala水解酶) 已被纯化。 人工合成的IBA作为商品已有数年, 最近有人已从多种植物中分离到IBA及其结合物, 而且比IAA稳定。IBA通过IBA合成酶催化IAA形成, 此酶还可以催化这一过程的逆反应。当植物组织与IBA一起保温时, 组织中结合态和游离态的IAA都稳定地升高。此外, 有研究表明植物在干旱、高盐浓度等逆境条件下及使用外源ABA可导致IBA含量和IBA合成酶活力的增高。 IAA可以通过侧链 (脱羧) 或吲哚环 (非脱羧) 的氧化而分解, 其脱羧氧化是通过过氧化氢酶催化, 而非脱羧氧化过程较为复杂。结合态生长素参与非脱羧的氧化过程, 例如在杂交山杨 (Populus tremula×P.tremuloides) 中, 非脱羧的氧化途径为:IAA→IAA门冬氨酸结合物 (IAA-Asp) → 氧化态IAA门冬氨酸结合物 (OxIAA-Asp) →氧化态IAA (OxIAA)。另外, 也有不形成结合态IAA而直接进行非脱羧氧化的例子, 如玉米中非脱羧氧化途径为:IAA→氧化态IAA (2-OxIAA) →7-羟基氧化态IAA (7-hydroxy-OxIAA) →7-羟基氧化态IAA葡萄糖结合物 (7-hydroxy-OxIAA-glucose)。 2 h+-atp反应结果 在讨论生长素的作用机理时, 必须考虑如下3个