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小麦多酚氧化酶活性与面团颜色性状的分子标记 颜色是评估小麦产品（如条状和馒头）品质的重要指标，是质量遗传改善的重要目标。多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）所催化的化学反应是引起面团或面条颜色褐变的主要原因，可解释面条颜色变异的55%～70%。PPO主要分布在小麦籽粒的糊粉层，面粉PPO的含量仅占籽粒总PPO的3%左右。早在1907年人们就开始了PPO的研究，至今已在小麦中发现了12种PPO同功酶。Okot-Kotber等研究表明，基因型是决定小麦PPO活性的主要因素，但也受环境条件的影响。不同品种间酶活性可相差10～14倍，因此通过遗传途径降低PPO活性是可行的，有可能培育出多酚氧化酶活性接近零的品种。美国、加拿大、澳大利亚等国的小麦育种项目已将其列为重要育种目标。我国冬小麦品种间PPO活性变异较大，培育低PPO活性小麦品种的工作已经初步开展。 目前主要利用生化方法测定籽粒PPO活性，对育种材料和后代进行选择，成本较高，且仅是对表型的选择，可靠性较差。寻找与小麦籽粒PPO活性紧密连锁的分子标记进行辅助选择，是基于基因型的选择，可靠性强。国外研究发现的一些PPO活性分子标记多为RFLP和AFLP标记，在育种实践中应用起来比较烦琐，不适宜于分子标记辅助选择。因而，筛选易于应用且成本较低的SSR标记，用于PPO活性的辅助选择，必将有利于小麦制品颜色性状的遗传改良。 张立平等研究表明，在小麦染色体2AL上有一个籽粒PPO活性的主效QTL(quantitative trait locus），可解释PPO活性遗传变异的37.9%～50.0%，该QTL与SSR引物Xgwm312紧密连锁。本实验的目的是验证Xgwm312与小麦品种PPO活性的关系，以明确使用Xgwm312进行PPO活性分子标记辅助育种的可能性。 1 材料和方法 1.1 ppo活性差异筛选 2000～2001年度，203份冬麦区品种（系）种植于河南安阳中国农科院棉花研究所，田间管理按常规进行，收获籽粒用于PPO活性差异筛选。这些品种（系）多为生产上的主栽品种和有推广应用前景的品系，基本上反映了我国冬播麦区小麦生产和育种的现状。 1.2 r-ppo活性测定 参照华盛顿州立大学小麦品质实验室方法。 1.3 小麦组dna的提取 参照Sharp等人（1998）的SDS方法提取小麦叶片的基因组DNA。 1.4 序列合成同态 根据R?der等研究开发的SSR引物Xgwm312的序列合成。 上游引物：ATC GCA TGA TGC ACG TAG AG 下游引物：ACA TGC ATG CCT ACC TAA TGG 1.5 ssr标记检测 1.5.1 pcr扩增时间 20μl总体积中包含1×PCR buffer(50 mmol·L-1KCl,10 mmol·L-1Tris·Cl,0.01%明胶）、MgCl21.5 mmol·L-1、dNTP(A.T.C.G）各250μmol·L-1、TaqDNA聚合酶1U、每条引物4pmol、模板DNA 80 ng。PCR反应程序为：首先94℃变性5 min；然后94℃变性1 min,55℃退火55 s,72℃延伸1 min，共36个循环；最后72℃延伸10min。 1.5.2 n-methylusing 0的1×TBE；制胶用6%聚丙烯酰胺胶储存液（UREA 420.2g、Acrylamide 60.0 g、N’N-Methylenebisacrylamide 3.16 g、10×TBE 50 ml，定容至1 000 ml)60 ml、10%过硫酸铵（APS)300μl、TEMED 60μl、混合均匀后灌胶，胶型为380 mm/300 mm/0.4 mm；电泳程序为首先100W预电泳30 min，插60孔加样梳，点样后80W电泳60 min。 1.5.3 agno3-na2co3的制备 (1）脱色与固定：将胶板放入10%冰醋酸中轻摇30min；(2）漂洗：用蒸馏水漂洗3次，每次3 min；(3）银染：1L 1%的Ag NO3溶液中加2 ml37%的甲醛，放入胶板轻摇30 min；(4）蒸馏水漂洗约20 s；(5）显影：在预冷的1L 30%的Na2CO3溶液中加2 ml甲醛和200μl 1%NaS2O3溶液，放入胶板轻摇直到目标片段显示出来；（6）终止：迅速将胶板转入10%冰醋酸溶液中，终止显色反应；（7）用蒸馏水漂洗2 min；(8）将胶板自然干燥后，记录带型并用数码相机照相。 2 结果与分析 2.1 不同麦区抗菌材料间籽粒ppo活性的变化 将供试品种（系）籽粒PPO活性的平均值等参数列于表1。 由表1可知，203份冬小麦籽粒PPO活性变化范围为1.19～12.00A475/g min-1×103，最大值是最小值的10倍，多数品