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高效液相色谱法测定糕点中富马酸二甲酯 氨基乙二羧酸是20世纪80年代开发的一种具有良好防霉效果的抗霉剂。适用的ph值范围较大。在ph为3.0.8.0的范围内，具有良好的防霉效果和长期的防霉期。由于富马酸二甲酯具有过敏性和其他毒性,对眼睛、皮肤有刺激,大量摄入会导致咽痛、呕吐、腹痛等后果,因此,广东省卫生厅在2000年就明文规定禁止在食品中使用富马酸二甲酯作为防霉保鲜剂。目前我国已拟禁止使用富马酸二甲酯作为防霉保鲜剂。目前,对高效液相色谱法测定食品中富马酸二甲酯的方法很多[1,2,3,4,5,6,7,8,9,10],但高效液相色谱法样品前处理简便,所用流动相简单、测定快速、分析结果准确等优点。 1 材料和方法 1.1 仪器和试剂 1.1.1 仪器 美国Agilent公司生产的Agilent-1100型高效液相色谱仪(出厂期:2002年);超声波清洗器。 1.1.2 标准溶液的配制 甲醇(色谱纯);甲醇:水(35∶65);标准溶液:准确称取0.100 0 g富马酸二甲酯,用甲醇溶解并定容至100 ml,得到1.0 mg/ml标准储备液;准确吸取标准储备液10.0 ml于50 ml容量瓶中用超纯水定容至刻度,得到0.20 mg/ml的标准使用液。 1.2 柱温度0.水采用甲醇-3.4和流动相2. 色谱柱:Eclipse XDB-C18,5 μm,4.6×150 mm;检测波长:216 nm;柱温:30 ℃;流动相:甲醇∶水(35∶65);流速:1.0 ml/min。 1.3 实验方法 1.3.1 现色体系的制备 准确称取2.0 g粉碎面包或月饼样品于25 ml比色管中,加入12 ml甲醇,超声振荡30 min,然后用超纯水定容至25 ml,混匀后经0.45 μm滤膜过滤后,进样测定。 1.3.2 系列溶液的制备 取标准使用液用水稀释为:0.50、1.0、5.0、10.0、40.0、100.0和200.0 μg/ml的标准系列。 1.3.3 进样量及定量测定 将上述制备的标准系列和样品提取液按照上述分析条件进行分析,进样量为20μl。以保留时间定性,以峰面积定量。标准色谱图见图1,样品色谱图见图2。 2 流动相和柱温 分别用甲醇-氨水溶液、甲醇-水、甲醇作溶剂对样品进行提取实验,发现用甲醇-氨水溶液作提取液时,富马酸二甲酯在碱性条件下会分解,再用酸调节提取液pH值,对此反应不可逆。因此不能用甲醇-氨水溶液作为提取液;直接用甲醇-水作提取液回收率偏低;故本法先采用12 ml甲醇提取,再用纯水定容至25 ml,其回收率和分离效果均理想;只用甲醇作提取液也能取得理想效果。 选用30∶70、35∶65和40∶60不同比例的甲醇-水作流通相,分离效果均好,能达到理想的灵敏度。甲醇比例越大,保留时间越短,当甲醇∶水比例为35∶65时,富马酸二甲酯保留时间为6.69 min。该法选流动相35∶65体积比例的甲醇∶水作为流动相。 在标准溶液中添加浓度为10 mg/L的糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸钠等溶液用本法进行测定,所加干扰物对本实验均无干扰。 选用常温(20 ℃以下)、25 ℃、28 ℃、30 ℃试验,结果发现柱温越低,灵敏度下降,柱温越高,灵敏度高。选择柱温30 ℃能取得较好的灵敏度。 将标准系列溶液分别进样20 μl,线性范围为:0.5～200 mg/L。回归方程y=241.26x- 243.09,相关系数为0.999 8,以月饼、面包为样品按本法进行处理和测定,以3倍仪器噪音计算出本法的检出限为0.24 mg/L。 对面包、月饼样品进行3个水平加标测定,方法的回收率见表1。用相同条件对同一样品进行平行测定6次,其平均相对标准偏差分别为0.61%、0.93%。 3 高效液相色谱条件下富马酸二甲酯的hplc检测 通过用甲醇∶水作为提取液超声提取后,在优化的高效液相色谱条件下,成功地对富马酸二甲酯进行了HPLC检测。实验结果表明,该法灵敏度高、准确度好、快速、简便。 2.1 萃取溶液类型的选择 2.2 流量相的确定 2.3 干扰实验 2.4 柱温选择 2.4 线性检测方法的限制 2.5 方法的精度和精度