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百合系内种质资源的issr鉴定 百合是百合科百合属植物的总称，也是百合科百合属植物的重要根茎（陈俊宇，2000，中国林业出版社，第248页）。其花形优美,品质高贵典雅,与月季、菊花、郁金香并列为世界4大切花。近20年来,百合跃居为荷兰第二大球根花卉,而国内百合生产种球大多依赖进口,种球费高居切花成本7成以上(刘华夏,2009)。百合杂交育种工作开展缓慢主要是因为生长周期长,种间杂交困难。伴随着组织培养技术和分子标记技术的迅猛发展,使不具有亲和性的品种间杂交成为了可能,大大加快了百合育种速度(刘亚娟,2009)。 本研究所用百合杂种是通过提前去雄、套袋授粉获得的,但胚拯救过程中胚乳或其它母体组织也有可能发育成苗,为了保证百合杂种后代的真实性,需要对其进行杂种鉴定。通过观察杂种后代的形态特征来进行,所需年限较长,受环境影响大。借助分子标记手段,可以在杂种幼苗进行早期鉴定,并且不受环境条件的影响,可快速可靠地确定其是否为真杂种。为确定杂种的真实性,本研究采用ISSR-PCR的方法对杂交育种获得的5个杂种进行杂种鉴定。 1 结果与分析 1.1 dna电泳检测结果 本研究用物基因组提取试剂盒(天根生化科技有限公司)提供的步骤,提取的DNA电泳检测表明(图1),DNA主带清晰明亮,无明显的拖尾现象,点样孔基本无滞留,获得高质量的DNA是后续工作顺利进行的有利保证。 1.2 pcr检测dna 本研究设计了三种PCR试验方案对提取的‘Navona’的DNA进行PCR扩增,每种方案用两个引物3A02和3A31,每个引物进行4组重复。结果表明,试验方案2反应体系稳定,且扩增的条带较清晰,效果较好(图2)。 1.3 引物扩增的条带 采用试验方案2,分别用15种引物对所有的亲本和子代的DNA进行PCR扩增,扩增产物进行凝胶电泳,电泳结果表明引物3A19和3A20得到的条带比较清晰,并且条带较多(图3),共计得到29条DNA条带,其中多态性条带24条,占总条带数的82.76%。 利用扩增结果对亲本及杂种的亲缘关系进行分析,从表1及图3可以看出,引物(CT)7AAA扩增出的‘Black Out’בLoreto’条带中有8条和两亲本共有,有2条与母本共有的特异条带,有1条与父本共有的特异条带,没有杂种特有条带;而在引物(CT)7AGT中有6条和两亲本完全共有的条带,有2条与母本共有的特异条带,有2条与父本共有的特异条带,还有1条杂种特有条带,两个引物扩增的条带大部分与亲本相同,占总带数的63.64%。由此可见‘Black Out’בLoreto’杂种不仅具有单亲本带型和新带型,还有两个亲本的相加性带型。 引物(CT)7AAA扩增出的‘Mount Duckling’自交的后代条带与亲本共有,无杂种特异条带出现,而引物(CT)7AGT扩增的条带中有1条杂种特异条带,两个引物扩增的条带大部分与亲本共有,占总带数的92.86%。由此可见‘Mount Duckling’自交得到的杂种兼具亲本的带型和新带型。 引物(CT)7AAA扩增出的‘Navona’בCheops’条带中有10条与两亲本共有,有2条与父本共有,无杂种特异条带出现;而引物(CT)7AGT扩增的条带中有5条同两亲本,有1条同母本,1条同父本,并有1条杂种特有条带,两个引物扩增的条带大部分与亲本共有,占总带数的75%。总体上看,杂种‘Navona’בCheops’不仅具有单亲本带型和新带型,还有两个亲本的相加性带型,并且与父本共有的特异带型多于与母本共有特异性条带。 引物(CT)7AAA扩增出的‘Navona’בDetroit’条带中有7条与两亲本共有,有2条与父本共有,无杂种特异条带出现;而引物(CT)7AGT扩增的条带中有4条与两亲本共有,有1条与母本共有,1条与父本共有,并有2条杂种特有条带,两个引物扩增的条带大部分与亲本共有,占总带数的64.71%。总体上看,杂种‘Navona’בDetroit’不仅具有单亲本带型和新带型,还有两个亲本的相加性带型,并且与父本共有的特异带型多于与母本共有特异性条带。 引物(CT)7AAA扩增出的‘Navona’בTresor’条带中有5条两亲本共有,有1条与母本共有,有1条与父本共有,并有1条杂种特异条带出现;而引物(CT)7AGT扩增的条带中有4条与两亲本共有,有3条与母本共有,1条与父本共有,并有1条杂种特有带,两个引物扩增的条带大部分与亲本共有,占总带数的52.94%。总体上看,杂种‘Navona’בTresor’仅具有单亲本带型和新带型,还有两个亲本的相加性带型,并且与母本共有的特异带型多于与父本共有特异性条带。 2 系选育苗的鉴定 获得百合杂种的同时,对所得的杂种苗进行早期鉴定对于百合新品种培育具有十分重要的意义。百合杂种幼苗从播种到