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茯苓提取液中多糖、总糖的测定

椰子茯苓汤用于治疗水肿、尿少、脾虚、食少、心烦意乱、失眠等症状。具有健脾健心、补水补水的功效。主要含有β-茯苓聚糖(β-Puchyman)即茯苓多糖、茯苓糖[Pachymose(C10H24O14)]、三萜类化合物茯苓酸(Tumulasieacid)、松苓酸(Pmicoicacid),此外尚含有组氨酸、胆碱、葡萄糖等其他成分,其主要药理活性成分,具有抗肿瘤,提高免疫功能的作用。

《中国药典》1995年版Ⅰ部等有关资料,均未对茯苓多糖进行定量检验。为了确定茯苓总糖、多糖的含量,本实验利用苯酚-硫酸法制得的醛糖衍生物,采用分光光度法对茯苓多糖进行含量测定。

1仪器和试剂盒

1.1仪器

1.2试验药物

1.3苯试剂的制备

2实验方法

2.1提取液的制备

精密称取本品细粉5g,置圆底烧瓶内,加水100ml,回流提取2h,乘热过滤,重复提取2次,用少量水洗渣,滤过与上液合并,浓缩,转移至100ml容量瓶内,加水稀释至刻度,即得。

2.2试验溶液的制备

2.2.1沉淀成分配液制备

照2.1项下操作,取上稀释液2ml置离心器中,加80%乙醇10ml离心,2500r/min,30min后取出倾去上清液,将沉淀移至50ml容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。精密量取上液1ml加1ml水于具塞试管中,加4%苯酚1.0ml,混匀,迅速加入浓H2SO47.0ml,摇匀,于40℃水浴中保温30min后移至冰水浴中,放置30min后取出。

2.2.2l处于100ml容量瓶

按2.1项下操作,取稀释液3.0ml至100ml容量瓶中,加水至刻度。精密量取该溶液2ml置具塞试管中,自加4%苯酚1.0ml起依次操作。

2.3测量条件的选择

2.3.1检测方法

按2.2.1方法操作。对照液为:取2ml水于具塞试管中,自加4%苯酚起,依法操作,从440～510mm处进行吸收度测定,结果见表1。

在490nm处测得有最大吸收,故选择490nm为测定波长。2.3.2标准曲线的测定:精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖60mg,置100ml量瓶中,加水使溶解并稀释至刻度(每1ml中含无水葡萄糖0.6mg)。精密吸取该溶液0.0,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml分别置50ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密吸取上述各浓度的标准溶液2ml,于具塞试管中。照2.2.1项下自加苯酚起依次操作,以第1份为空白,在490nm处测定吸收度,见表2。

回归方程A=-0.0128+0.1098X,V=0.9990

实验表明无水葡萄糖在20.48～122.88μg之间符合Beer定律,呈良好的线性关系。

2.3.3稳定实验

取2.3.1方法操作,每隔40min测定吸收度,结果表明,供试液在3h内显色稳定,见表3。

3返回率实验

精密称取已知供试样品5份,每份3g,分别加入无水葡萄糖对照品,回流提取,照上述测定法测定,结果见表4。

4定吸收度试验

多糖照2.2,总糖照2.2.2同法操作,在490nm处测定吸收度,结果见表5。

根据5批样品测定结果,规定本品含总糖按无水葡萄糖(C6H12O6)计,不得少于0.8%,含多糖按无水葡萄糖(C6H12O6)计,不得少于0.25%。

5分光光度法测定法

5.1多糖、总糖的测定方法较多,本实验采用水提醇沉法,提取茯苓的总糖、多糖在浓H2SO4作用下,水解成单糖并迅速脱水成糖醛衍生物,此糖醛衍生物和苯酚缩合成有色化合物,可用分光光度法于490nm处测定。此法简便,显色稳定,灵敏。

5.2操作中必须注意时间、温度对实验结果的影响,要在规定的条件下进行,以保证测定结果的真实,无误。

TU-1221型分光光度计(北京应用仪器厂),80-1离心机(上海手术机械厂)。

茯苓(由湖北省药材公司购得),苯酚、乙醇、硫酸均为AR级。

称取苯酚4g,加水100ml使溶解,至棕色瓶中,得浓度为4%苯酚试液。

致谢:本文得到罗田县药检所化学室主任袁基焱同志指导!