YYT 0251-1997 微量青霉素试验方法.docxVIP

备案号：382—1997

中华人民共和国医药行业标准

YY/T0251—1997

微量青霉素试验方法

Testmethodsofpenicillin

1997-10-1997-0

1997-10-

1997-06-

国家医药管理局发布

YY/T0251—1997

前言

本标准制定中，清场后环境、设备中残留微量青霉素的采样方法等效采用了日本工业协会GMP委员会编《防止交叉污染指南》,其他部分非等效采用了美国食品药品管理局的《食品及药品中的青霉素污染》和美国联邦法规的有关内容。

本标准起草单位：上海四药股份有限公司、华北制药股份有限公司、鲁抗医药股份有限公司。

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中华人民共和国医药行业标准

微量青霉素试验方法YY/T0251—1997

Testmethodsofpenicillin

1范围

本标准规定了用微生物法测定微量青霉素的试验方法。

本标准适用于成品、清场后环境、设备及空气中微量青霉素的测定。最小检出量0.008u/mL。

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

中华人民共和国药典1995年版二部

3方法提要

利用抗生素的抗菌性质及在琼脂培养基内的扩散渗透作用，将被检物放入摊布高度敏感检定菌的培养基上，产生抑菌圈，根据抑菌圈直径判断青霉素污染，再根据标准曲线或数学公式计算出污染青霉素的量。

4试剂和溶液

本试验所用试剂除特殊注明外均为分析纯，所用水均为蒸馏水。

4.1青霉素标准品。

4.2乙酸正戊酯。

4.3培养基Ⅱ:中华人民共和国药典1995年版二部(或培养基I:美国药典XXⅡ版)。

4.4营养琼脂培养基：中华人民共和国药典1995年版二部。

4.510g/L磷酸盐缓冲液：pH=6.0

称取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g,加蒸馏水至1000mL,滤过，在115℃灭菌30min。

4.6100g/L磷酸盐缓冲液：pH=2.5

称取100g磷酸二氢钾，溶于800mL蒸馏水中，加0.2mL浓盐酸，再加蒸馏水至1000mL,用磷酸溶液[c调节pH值，使灭菌后pH为2.2～2.5,备用。

4.710g/L磷酸盐缓冲液：pH=2.5将磷酸盐缓冲液(4.6)稀释10倍。

4.8青霉素酶溶液

用鲜肉汤将浓的青霉素酶溶液稀释到1000u/mL,37℃恒温培养5天，5℃以下冰箱保存备用。

4.9磷酸溶液

取85%磷酸12.3mL加蒸馏水17.7mL。

4.10检定菌液

国家医药管理局1997-06-09批准1997-10-01实施

YY/T0251—1997

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4.10.1藤黄微球菌ATCC93411检定菌液

将工作用菌种ATCC9341的斜面培养物，接种于营养琼脂培养基斜面上，32～35℃培养24h,然后用灭菌生理盐水洗下，此菌液5C以下冰箱保存可用15天，使用前以青霉素标准液(0.04u/mL)标定，100mL培养基内加菌量所致抑菌圈直径15～18mm为宜。

4.10.2藤黄微球菌ATCC9341a2(耐50mg/mL链霉素)检定菌液

将工作用菌种ATCC9341a代替4.10.1工作用菌种ATCC9341,其他操作步骤按4.10.1进行。

5仪器和材料

5.1培养皿：内径90mm,皿深16～17mm,硬质玻璃，皿底平坦，光洁，薄厚均匀、透明。

5.2钢管(牛津杯):不锈钢制，外径7.8mm±0.1mm,内径6.0mm±0.1mm,高10.0mm±0.1mm,同批钢管的重量极差不超过0.05g,内外光亮，无凹凸痕迹。

5.3吸管：1mL、2mL、5mL、10mL,A级。

5.4容量瓶：50mL、100mL,A级。

5.5分液漏斗：150mL。

5.6陶瓦盖：内径103mm,外径108mm,表面平坦，吸水性强。

5.7生化培养箱：28℃±1℃。

5.8恒温水浴箱：控温范围0～100℃。

5.9微波炉或电炉。

5.10电热干燥箱：控温范围