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涂片的染色规范

最常用于细胞病理学涂片检查的是苏木素-伊红（HE）染色和巴氏染色。

一些特殊染色、组织化学染色和免疫组织化学染色也用于细胞病理学的涂片检查（参见第4章第一、二节）。

（一）苏木素-伊红（HE）染色（参见本章第一节的“六”项）。

（二）巴氏（Papanicolaou）染色

巴氏染色时，细胞透明度好，细胞结构清晰，色彩丰富而鲜艳，主要用于妇科细胞学涂片、痰涂片和富含鳞状上皮细胞的涂片检查。

1.试剂配制

(1)Harri苏木素液（参见本章第一节的“六”项）

（2）盐酸-乙醇液

浓盐酸1ml

70%乙醇99ml

（3）橙黄G6液

橙黄G60.5g

蒸馏水5ml

无水乙醇95ml

磷钨酸0.015g

先将橙黄G溶于蒸馏水中，再加入无水乙醇，然后加入磷钨酸。

(4)EA36染液

①EA36储备液

A液：亮绿0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。

B液：伊红0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。

C液：俾斯麦棕0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。

②EA36工作液

EA36储备液的A液45ml

EA36储备液的B液45ml

EA36储备液的C液10ml

磷钨酸0.2g

碳酸锂饱和水溶液1滴

2.染色程序

（1）将已经固定的涂片置于80%乙醇中2min。

（2）蒸馏水洗2min。

（3）苏木素液染核10～12min，自来水洗。

（4）盐酸-乙醇液分解约20～30s，至涂片呈淡橙红色。

（5）流水冲洗10～15min，蒸馏水洗。

（6）依次用80%、95%乙醇脱水，各2min。

（7）橙黄G6液染色3～5min。

(8)95%乙醇洗2～3次，洗去多余染液。

(9)EA36工作液染色3～5min。

(10)95%乙醇洗2～3次，洗去多余染液。

（11）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

3.染色结果：细胞核呈深蓝色，核仁呈红色；不同分化类型的鳞状上皮细胞，其胞浆颜色各异：角化细胞呈粉红色，不全角化细胞呈橙黄色，角化前细胞呈淡蓝或淡绿色；红细胞呈橙红或鲜红色，白细胞的胞浆呈淡蓝绿色；黏液呈淡蓝或粉红色。

（三）瑞氏（Wright）染色

瑞氏染色一般用于血液涂片，也可用于检查肿瘤细胞。

1.试剂配制

（1）瑞氏染液

瑞氏染料1g

甲醇600ml

将瑞氏染料放入研钵内，加入适量甲醇与之混合研磨，使染料逐渐溶解。将溶解的染液倾入另一玻璃瓶内，然后再加入适量甲醇继续研磨；未溶解的染料如此反复多次，直至染料完全溶解、甲醇用完为止。染液避光保存备用。

（2）磷酸盐缓冲液

无水磷酸氢二钠6.5g

磷酸二氢钠4g

蒸馏水1000ml

pH:6.5~7.0

2.染色程序

(1)涂片自然干燥。

（2）滴加瑞氏液染色1min。

(2)滴加等量的磷酸缓冲液，轻轻摇荡玻片或用洗耳胶球在玻片上轻轻吹气，使两液体混合均匀，持续10～15min。

（4）流水洗去染液。

（5）涂片风干后，二甲苯透明，中性树胶封片。

3.染色结果：胞核呈紫红色，胞浆呈紫蓝色，黏液呈粉红色或淡蓝色。

（四）May-Grünwald-姬姆萨（Giemsa）染色

May-Grünwald-吉姆萨染色适用于造血系统的细胞涂片和鉴别恶性淋巴瘤的类型。May-Grünwald原液和姬姆萨原液配制烦琐，可直接购买。

1.试剂配制

(1)May-Grünwald工作液

May-Grünwald原液1份

蒸馏水6～10份

使用前配制。

（2）姬姆萨工作液

姬姆萨原液1份

蒸馏水6～10份

使用前配制。

2.染色程序

（1）涂片自然干燥，蒸馏水洗1～2min。

(2)May-Grünwald工作液染15～30min。

（3）自来水冲洗，洗去载玻片上的染液，蒸馏水清洗。

（4）姬姆萨工作液染15～30min。

（5）自来水冲洗，洗去载玻片上的染液。

（6）涂片风干后，二甲苯透明，中性树胶封片。

3.染色结果：胞核呈紫红色，胞浆和核仁呈蓝紫色。

（五）Rakoff染色

Rakoff染色用于阴道细胞学涂片快速测定雌激素水平。

1.试剂配制

(1)5%淡绿水溶液83ml

(2)1%伊红水溶液17ml

将两液混合后使用。

2.染色程序

（1）用细胞刷沿阴道侧壁刷取黏膜鳞状上皮细胞，放入装有1～2ml生理盐水的试管内。

（2）在试管内滴入3滴Rakoff染液，用细胞刷在染液中轻摇混合。

（3）将1~2滴混合液滴于载玻片上，制成涂片。

（4）待涂片干燥后，用中性树胶封片。

染色结果：鳞状上皮细胞的嗜酸性和嗜碱性胞浆区分明显。角化前细胞的核呈网状，角化细胞的固缩核呈基本不着色的空泡状。

（六）猩红-固绿染色

猩红-固绿染色用于显示性染色体。

1.试剂配制

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