酶的分离纯化课件.pptVIP

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2025-10-29 发布于未知
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酶的分离纯化课件.ppt

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5.4.6萃取分離按照兩相的組成不同，萃取可以分為：有機溶劑萃取雙水相萃取超臨界萃取反膠束萃取Ion-exchangechromatography圖4-39梯度溶液的製備方法和洗脫曲線（a）線性梯度；（b）凸形梯度；（c）凹形梯度；（d）編程梯度凝膠過濾層析凝膠過濾（gelfiltration）又稱分子篩層析（molecularsievechromatography）、排阻層析（exclusionchromatography）Size-exclusionchromatography分配係數KdKd=————ViVo——外水體積Vi——內水體積Ve——某組分的洗脫體積Ve-Vo凝膠型號顆粒大小/μm溶脹體積/(ml/g)分離範圍（Mr）SephadexG-10SephadexG-15SephadexG-25SephadexG-50SephadexG-75SephadexG-100SephadexG-150SephadexG-2004～1204～12050～15050～15040～12040～12040～12040～1202～32.5～3.54～69～1112～1515～2020～3020～30小於7×102小於1.5×1031.0×103～5.0×1031.5×103～3.0×1043.0×103～8.0×1044.0×103～1.0×1055.0×103～3.0×1055.0×103～6.0×105葡聚糖凝膠層析介質的有關參數凝膠的種類和性質1)交聯葡聚糖凝膠（dextrangel)商品名:Sephadex型號SephadexG－10至G-200型號使用範圍（蛋白質的分子量）含瓊脂糖（℅）?6BSepharose4B2B104～3×106105～3×107106～108642?6BSepharoseCL4B2B?同上同上?0.5m?Bio-GelA1.5m5m15m50m150m10～500×10310～150010～500040～15000100～500001000～1500001086421Sepharose及Bio-gelA型號2）瓊脂糖凝膠（agarosegel)商品名:Sepharose（瑞典）;Bio-GelA(美國）親和層析(AffinityChromatography)又稱：功能層析（functionchromatography）生物專一吸附（biospecificadsorption）選擇層析（selectivechromatography）配基固相化親和吸附解吸附Affinitychromatography親和層析的四個要素所要分離的目的產物相應的配基酶抗體凝集素激素底物、抑制劑、輔酶（輔因數）抗原、病毒、細胞多糖、糖蛋白、細胞受體受體、載體蛋白目的產物與相應的配基常用的親和介質及專一性配體常用手臂根據欲分離組分與配基的結合特性,親和層析可以分為：共價親和層析疏水層析金屬離子親和層析免疫親和層析染料親和層析凝集素親和層析疏水層析（HydrophobicInteractionChromatography,HIC）產品名稱載體配基生產公司苯基Sepharose4B瓊脂糖凝膠珠苯基Pharnacia辛基Sepharose4B瓊脂糖凝膠珠辛基Pharnacia烷基交聯瓊脂糖凝膠珠瓊脂糖凝膠珠烷基(Cn)以色列一些商品疏水層析介質PrinciplesofOperationforChromatographyTechniquesGelFiltrationIonExchan