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非淀粉多糖水解酶活力测定

1范围

本标准规定了非淀粉多糖水解酶活力测定的实验室基本要求、材料、试剂和仪器基本要求、取样要求、测定方法、实验人员以及记录与测试报告。

本标准适用于酶制剂原料（包括发酵液、粗提液、纯化液、成品）中的纤维素酶、α-半乳糖苷酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶和果胶酶的活力测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB1886.174食品安全国家标准食品添加剂食品工业用酶制剂

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27025检测和校准实验室能力的通用要求

GB/T36861饲料添加剂β-甘露聚糖酶活力的测定分光光度法

GB/T44738饲用果胶酶活力的测定

NY/T912饲料添加剂纤维素酶活力的测定分光光度计法

NY/T4361饲料添加剂α-半乳糖苷酶活力的测定分光光度计法

QB/T4481β-葡聚糖酶制剂

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

非淀粉多糖non-starchpolysaccharide

植物组织中若干单糖通过糖苷键组成的多糖聚体，是除了淀粉以外的其他多糖类物质，主要由纤维素、果胶、半纤维素等组成。

3.2

非淀粉多糖水解酶non-starchpolysaccharidehydrolase

能够催化非淀粉多糖中的糖苷键断裂，产生单糖或寡糖的一系列酶，主要包括纤维素酶、α-半乳糖苷酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶、果胶酶等。

3.3

纤维素酶cellulase

能降解纤维素生成纤维寡糖、纤维二糖和葡萄糖的水解酶。

3.4

α-半乳糖苷酶α-galactosidase

能催化α-半乳糖苷键水解的糖苷水解酶。

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3.5

木聚糖酶xylanase

能破坏植物的纤维组织，将木聚糖分解成木糖的水解酶。

3.6

β-葡聚糖酶β-glucanase

能催化β-葡聚糖的β-1,3糖苷键或β-1,3和β-1,4糖苷键的水解酶。

3.7

甘露聚糖酶mannanase

能催化甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖中β-1,4-甘露糖苷键的水解酶。

3.8

果胶酶pectinase

能水解果胶，生成含有还原性基团产物的酶。

4实验室基本要求

4,1实验室应符合GB/T27025的规定。

4.2实验室宜区分以下功能区域：

a)样品制备区：用于底物溶解、酶液稀释，配备超纯水系统和无菌操作台；

b)反应控制区：放置恒温设备，避免振动和光照干扰；

c)分析检测区：独立分光光度计操作台，避免灰尘污染光路；

d)数据记录区：与实验区域隔离，防止电子设备干扰精密仪器。

4.3实验室应配备应急处理设施，包括洗眼器、急救箱及防毒面具。

4,4实验室应建立废物处理制度，分类收集化学废液、生物废料及一次性耗材，并委托专业机构处置。

5材料、试剂和仪器基本要求

5.1实验耗材、试剂应从经过资质机构认可的厂家货供应商采购，必要时对供应商进行评估。

5.2实验耗材、试剂在使用前进行质量检查。

5.3实验室仪器应定期进行维护和校准，校准周期宜不超过12个月。

5.4应严格按照操作规程使用仪器。

6取样要求

6.1一般要求

6.1.1取样人员应对手部、取样口及周围环境进行消毒。

6.1.2应使用无菌、洁净的专用取样器具，器具所用材质不应对酶活力产生影响。

6.1.3样品采集后应立即处理或测定，如需储存或输送，应置于冰浴或4℃冰箱中冷藏，并在4小时内完成检测。

6.1.4样品应及时加贴唯一的标签，标签内容应包括样品编号、样品名称、取样时间与人员，以及其他任何必要的信息。标签应防潮，书写的内容应不可擦除。

6.2取样点

所取样品应具有代表性，取样点包括但不限于发酵过程中规定的取样点、发酵终点、离心/过滤终

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点、浓缩终点、配制/混合终点。

6.3取样频率

6.3.1批次生产时，每个生产批次应在规定的取样点至少取样一次。

6.3.2连续生产时，应每间隔24小时取样一次。

6.3.3当设备调试、工艺变更或出现异常情况时，应增加取样频率。

6.4取样方法

6.4.1固体样品：称取适量样品（精确至0.0001g）至100mL容量瓶中，加入对应缓冲液溶解并定容，搅拌30分钟。

6.4.2液体样品：移取适量样品（精确至0.0001mL）至100mL容