病理科免疫组化染色失败应急预案演练脚本（2篇）.docxVIP

病理科免疫组化染色失败应急预案演练脚本（2篇）

第一篇病理科免疫组化染色失败应急预案演练脚本

演练背景

病理科常规检测批次中，当日接收的12例手术标本免疫组化染色切片（涉及乳腺癌ER、PR、HER-2，肺癌ALK、PD-L1等项目），在DAB显色步骤结束后，经技术人员初筛发现8例切片出现染色异常：其中3例为无阳性信号（包括已知阳性对照组织），4例为背景弥漫性强着色，1例为染色不均一（部分区域阳性、部分区域无信号）。此时距出具初步诊断报告时限仅剩8小时，且其中2例为术中冰冻后常规石蜡标本，临床需尽快明确分型以制定后续治疗方案。

演练参与人员及职责

1.现场总指挥：病理科主任（负责整体调度、决策确认及与临床沟通协调）

2.技术组组长：免疫组化技术主管（负责现场技术排查、应急操作指导及数据记录）

3.技术操作人员：2名免疫组化技术员（负责具体排查操作、重新染色及质量控制）

4.质控员：病理科质控专员（负责全程监督、异常数据留存及后续原因分析报告撰写）

5.临床联络员：病理科住院医师（负责与申请科室对接，反馈情况并了解临床需求）

6.设备管理员：病理科设备维护专员（负责仪器设备的故障排查与应急处理）

演练流程及具体操作

第一步：异常识别与应急启动（时间：09:15-09:25）

1.免疫组化技术员李XX在DAB显色后镜下初筛时，发现第3批次切片中8例染色异常，立即停止后续脱水透明操作，保留当前状态切片，并第一时间向技术组组长张XX汇报：“张主管，第3批次12例免疫组化切片有8例异常，3例全片无阳性信号（含阳性对照），4例背景强染，1例染色不均，请求进一步处理。”

2.张XX立即前往操作间，通过光学显微镜复核异常切片，确认染色失败情况属实，同时查看同批次阴性对照切片：阴性对照无着色（排除DAB自显影），但阳性对照（乳腺浸润性癌组织）也无着色，初步判断可能存在试剂失效或抗原修复异常。随即启动《病理科免疫组化染色失败应急预案》，向现场总指挥王主任汇报情况，并通知质控员、设备管理员及临床联络员到位。

3.王主任接到汇报后，指示：“立即暂停该批次后续流程，先排查原因，同时优先保障术中冰冻后标本的重新检测，临床那边由李医师负责沟通，务必说明情况并争取理解。”

第二步：多维度原因排查（时间：09:25-10:05）

技术组组长张XX牵头，分三组同步开展排查：

1.试剂组排查（技术员刘XX负责）

-核对异常批次所用试剂：包括一抗（ER、PR、ALK等）、二抗、DAB显色液、抗原修复液、封闭血清的批号、有效期及储存条件。发现ER一抗的储存温度记录显示，昨日晚班技术员在整理冰箱时，误将该批次ER一抗从-20℃冰箱移至2-8℃冷藏层，且存放时间超过12小时（该一抗要求-20℃分装储存，避免反复冻融）。

-检测DAB显色液活性：取阳性对照组织切片，滴加新开启的同批号DAB显色液，37℃孵育5分钟后镜下观察，可见清晰阳性信号，排除DAB试剂失效。

-核对封闭血清：同批次封闭血清为山羊血清，与二抗来源（兔抗鼠/兔抗兔）匹配，且储存条件符合要求，排除封闭失效。

2.设备组排查（设备管理员赵XX负责）

-检查全自动免疫组化仪（型号：LeicaBOND-III）：查看仪器操作日志，抗原修复步骤显示“修复温度95℃，时间20分钟”，与常规设置一致；仪器内部温度传感器校准记录显示上周刚完成校准，偏差在±0.5℃范围内；检查仪器孵育舱湿度，显示为78%（符合要求60%-80%），排除仪器参数异常。

-检查抗原修复锅：同批次中部分手动染色切片也出现相同异常，修复锅显示温度98℃，时间25分钟，与常规操作一致，排除修复设备故障。

3.操作流程排查（技术员李XX负责）

-查看操作记录：该批次切片脱蜡用二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟，梯度乙醇脱水完全，无脱蜡不彻底痕迹；抗原修复后用PBS冲洗3次×5分钟，未出现切片干燥；一抗孵育温度为37℃，时间60分钟，与常规一致。

-复核切片预处理：查看蜡块包埋记录，该批次标本均为手术切除后6小时内固定，固定液为10%中性福尔马林，固定时间6-24小时，符合标本固定要求，排除标本处理不当。

第三步：原因确认与决策制定（时间：10:05-10:20）

1.各组汇总排查结果：核心原因锁定为ER一抗储存不当导致的活性丧失，同时4例背景强染切片可能与该批次一抗浓度因活性降低被技术员误调有关（技术员为保证染色强度，将ER一抗工作浓度从1:200调整为1:100，未记录调整原因）；1例染色不均切片经复核蜡块，发现标本组织厚薄不均（边缘仅2μm，中心达6μm），抗原修复时边缘组织过度修复导致抗原丢失。

2.技术组组长张XX向总指挥王主任汇报排查结论：“王