应用蚕豆根尖细胞微核技术对五种涪陵市售矿泉水致突变性检测.docVIP

【标题】应用蚕豆根尖细胞微核技术对五种涪陵市售矿泉水致突变性检测 【作者】梁峰 【关键词】蚕豆、微核、PI值、矿泉水 【指导老师】何秀利 【专业】生物科学 【正文】１引言微核(Micronuclei)是细胞经辐射或化学药物的作用后，在有丝分裂后期散失着丝粒的染色体片断形成的颗粒物质，是染色体发生畸变行为的一种表现[17]。其产生主要有两种方式：一是诱变剂打断DNA分子形成DNA分子断片，该断片因没有纺锤丝相连无法随染色体分离过程被拉向两极，因而随机滞留在某一个子细胞的细胞质中形成独立于细胞核之外的微小的具有核形态的微核；二是由纺锤丝毒剂打断纺锤丝造成整条染色体落后于核分裂周期形成微核。这两条途径发生的概率各为1/2。当外界环境中存在一定浓度的致突变物时，可使细胞发生损伤，从而使具微核的细胞增多，即微核细胞率上升。另外微核细胞率的上升，提示环境中存在有致突变物，亦即受试水样中含有能打断DNA分子的诱变剂或能打断纺锤丝的纺锤丝毒剂。从而表现出遗传毒性[14]。因此，微核可以作为反映真核细胞遗传物质损伤的一个常用的细胞遗传学指标。可用于环境污染监测、化合物致突变性检测、新药试验及癌症前期诊断等方面[7-8]。蚕豆根尖细胞微核试验（Micronucleutest,MC-NT）技术是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试终点的植物微核监测方法，该技术自1982年由Francesca Degrassi和Te Hsiu Ma建立以来,?特别是在水质污染和致突变物检测研究中得到了广泛应用[14]，其中在水质污染检测方面比较突出的有：田胜尼，彭少麟等人应用该技术检测南淝河水质的研究[21]、蒋琳，张丹等人的武汉市南湖区域不同污染水源对蚕豆根尖细胞有丝分裂期染色体影响的研究[5]和陈全战，张边江对内秦淮河水质的调查[3]。而在致突变物检测研究中，段昌群，王焕校运用不同浓度的重金属离子溶液处理蚕豆根尖细胞，从而排列出了不同重金属离子对蚕豆细胞遗传学毒性的强弱顺序[20]。由于蚕豆根尖细胞微核试验（Micronucleutest,MC-NT）技术是从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染程度的相互关系，所以具有灵敏度高、操作简便等优点，并被许多西方国家刊为规范监测方法，我国也将这一技术引入《环境监测技术规范》之中[14]。矿泉水饮料是取自可饮用的矿泉经过滤或其他物理方法处理后制成的，其一般生产的工艺流程如下：水源水→贮水罐(池)→多介质过滤→活性炭→粗滤(5～10μm)→精滤或超滤(0.12～1μm)→臭氧杀菌→保安过滤→灌装→封口→质检→贴标→装箱→入库。空瓶经消毒预洗→洗瓶机冲洗→灌装；瓶盖经消毒后冲洗[11]。在生产过程中是不添加任何的添加剂和防腐剂的，是纯天然的制品，一般不含有致突变物[15]。但是由于矿泉水水源地可能含有致突变因子或者在生产过程中受到污染，所以从理论上来说均可运用蚕豆根尖细胞微核试验（Micronucleutest,MC-NT）技术检测到较弱的致突变性的可能。蚕豆根尖细胞微核试验（Micronucleutest,MC-NT）技术作为一种常见的对水体致突变物检测的方法被广泛的应用于江河污水和生活用水的检测，但是运用此方法对市售矿泉水的检测比较少见，希望摸索其适宜的水样处理时间，以客观的结果为后人做类似实验奠定基础。2材料及方法２.１仪器设备及用具表2-1仪器设备及用具名称 个数显微照相系统 1台蒸馏锅 1个生化培养箱 1台电子天平 1台恒温水浴锅 1台光学显微镜 1台相差显微镜 1台唐磁盘 2个培养皿 10个试管 10只25ml烧杯 10个100ml烧杯 1个100ml容量瓶 1个100ml量筒 1个玻璃棒 1支棕色瓶 1个小试剂瓶 4个大试剂瓶 1个滴管 1只载玻片 1盒盖玻片 1盒解剖针 1把解剖剪 1把刀片 1块镊子 1把滤纸 1盒纱布 1包蒸馏瓶 1个酒精灯 1个２.２　实验药品表2-2实验药品名称 用量无水乙醇 500ml冰醋酸 400ml盐酸 200ml硫酸亚铁 2g凡士林 一盒２.３　试剂配制的方法2.3.1?改良苯酚品红染液的配制母液A：将3g碱性品红加入100ml 70%的乙醇中；母液B:取5%苯酚水溶液90ml，加入10ml母液A；苯酚品红染液：取45ml母液B，加入6ml 37%的甲醛；改良苯酚品红染液：取2-10ml苯酚品红染液，加90-98 ml 45%醋酸和1.8g山梨醇，在室温下保留2周使用[19]。2.3.2?醋酸洋红的配制先量取45ｍl的冰醋酸，在加入蒸馏水至100ｍl后，用酒精灯加热置沸腾，然后移去火源，徐徐加入２g洋红粉末，再加热至沸腾１－２min，待冷却后