应用蚕豆根利用蚕豆根尖微核技术监测长江涪陵段水污染情况.docVIP

【标题】利用蚕豆根尖微核技术监测长江涪陵段水污染情况 【作者】刘华生 【关键词】微核技术??微核率??污染指数??水质污染 【指导老师】何秀利 【专业】生物科学 【正文】1?引言蚕豆根尖微核试验（Micronucleus test,MCNT）技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核监测方法。由于断裂后的片段不具着丝点,到细胞分裂末期,断片流失在细胞质中成为微核。实验证明，环境诱变因子的强弱与诱发的微核率成正比，因此可用微核率大小来表示诱变因子的强弱。通过对不同水样点蚕豆根尖细胞微核千分率（MCN‰）及污染指数（PI）的测定[3],来测定水的污染程度。蚕豆是经典的遗传材料，近年来，蚕豆微核试验被广泛应用于环境污染，辐射损伤，化学诱变剂等的检测。利用蚕豆根尖细胞微核技术检测水质污染有以下优越性：灵敏度高，可靠性强，技术简单，易于操作。而且很有实用性；实验周期较短，且蚕豆根尖细胞周期中大部分时间处于对诱变剂敏感的间期，便于对污水的检测，精确度较高[1]。1985年开始研究应用蚕豆根尖微核技术直接检测淡水湖泊的水质情况。中国在此方面的研究开展较早，1979年方宗熙等与马德修合作开展“利用植物细胞微核检测环境污染”的研究。80年代以后先后用紫露草、蚕豆根尖、紫竹梅、石龙芮根尖等监测海水、淡水、工业污水，建立了不同的测试系统，提供了可靠的相关数据。尤其以紫露草四分体微核技术、蚕豆根尖微核技术备受关注[1]。目前，许多国家性机构和国家已经把该项技术列为监测环境污染的常规方法之一。由于材料易于培养成活、制片简单、易于镜检观察、经济实用、实验周期短、可信性强及四季均可开展工作而得以广泛应用。而蚕豆根尖微核技术同样应用广泛，由于灵敏度高、可靠性强、技术简单、易于操作，而且有显而易见的实用性；实用周期短且蚕豆根尖周期中大部分时间处于对诱变剂敏感的间期，便于遗传毒性检验试验，精确度也比较高。此后相继进行了蚕豆敏感品种的筛选、微核率、污染指数及与其它指示指标的关系的研究，并针对该技术的几个问题进行了探讨。近年来蚕豆根尖微核技术检测湖泊、河流污染等方面的研究进展很大。?微核技术主要有两方面的应用。一是应用于细胞水平上的遗传毒性研究,如1970年瑞士W.Schmid等人应用微核试验进行的药物研究。目前,在这一方面的研究主要是利用人淋巴细胞和小鼠骨髓红细胞来进行;二是应用微核进行环境监测。在大多数文献报道中，用于监测环境污染的微核技术通常采用植物微核技术。本实验利用蚕豆根尖微核技术对长江涪陵段水质进行监测，通过微核率大小来检验该段水质的污染状况，具有明显的实际意义，以此来改良水质的质量。蚕豆根尖微核实验原理:?环境污染物（如物理、化学、生物污染源）能诱发植物细胞的染色体畸变，染色体断片游离在细胞质中于分裂末期形成微核。蚕豆是对污染物较为敏感的植物品种，利用污染过的蚕豆根尖制成压片即可在光学显微镜下观察到微核，同时，由于微核率与污染物的浓度成正比，所以可根据观察统计到的微核数来判断其水体的污染程度[2]。2??实验材料?????采用当年成熟的饱满蚕豆种子为实验材料，购于涪陵种子公司。3??实验仪器设备及用品、药品3.1实验仪器设备及用品表3-1???实验主要仪器设备及用品名称 数量纱布 1包棕色瓶 6个培养皿 10个光学显微镜 1台恒温水浴锅 1个生化培养箱 1台其它还有:蒸馏锅、电子天平、相差显微镜、唐磁盘、试管、25ml烧杯、100ml玻璃棒烧杯、100ml容量瓶、100ml量筒、小试剂瓶、大试剂瓶、滴管、载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、滤纸、蒸馏瓶等3.2?实验药品表3-2实验主要药品名称 用量冰醋酸 500ml无水乙醇 600ml盐酸 200ml硫酸亚铁 2g凡士林 1瓶4??试剂配制的方法4.1固定液Carnoy固定液（无水乙醇：冰醋酸=3：l），固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混和的固定液。卡诺氏固定液是效果良好的固定液[5]4.2?解离液解离液是能够快速的将蚕豆根尖细胞杀死，并且使细胞与细胞之间变得松散，所以解离液的浓度和解离的方法可直接影响后一步的染色和压片的效果，在实验中解离液浓度主要有1mol/L和0.1mol/L的HCL溶液，经过实验效果的对比，决定使用0.1mol/L的HCL溶液在60℃下解离15min。4.3?醋酸洋红量取45ml的冰醋酸，在加入蒸馏水至100ml后，用酒精灯加热置沸腾，然后移去火源，徐徐加入２g洋红粉末，再加热至沸腾1－2min，待冷却后加入２％的硫酸亚铁，过滤于棕色瓶中[5]。