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第2 1 卷 , 第4 期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vol 21 ,No 4 ,pp435437
2 0 0 1 年 8 月 August ,2001
Spectroscopy and Spectral Analysis
绿荧光蛋白的双光子激发的荧光特性研究
1 ,2 3 ,4 1 1 1 2
夏安东 蒋诗平 朱纪军 沈耀春 陆祖宏 黄文浩
1 东南大学分子与生物分子电子学实验室 ,210096 南京
2 中国科技大学精密机械和精密仪器系,230026 合肥
3 中国科技大学国家同步辐射实验室,230029 合肥
4 中国科学院上海光学精密机械研究所,201800 上海
( )
摘 要 利用双光子激发方式研究了重组绿荧光蛋白 recombinant green fluorescent protein ,简称 rGFP 的光转换
特性 ,研究结果表明 rGFP 具有较强的双光子激发荧光。双光子激发的荧光偏振光谱表明 rGFP 在辐照前质子
态和去质子态之间存在着有效的能量转移过程。rGFP 辐照后导致生色团构象的变化 ,部分阻断了 rGFP 内源
的氨基酸与生色团之间的能量转移过程 ,导致 rGFP 的双光子激发的荧光强度下降。观察到 rGFP 的三光子激
( )
发的荧光特性 ,这种三光子激发的荧光主要来源于 rGFP 内源的氨基酸 色氨酸 ,酪氨酸等 的吸收。研究结果
对在实际使用定量的荧光显微镜时具有一定的指导意义。
( )
主题词 重组荧光蛋白 rGFP , 双光子激发
( )
双光子激发的荧光现象已广泛应用于分子的激发态结构 量 质子 转移过程。
研究。近来由于飞秒激光技术的发展和共焦激光显微镜技术
在生命科学研究中的广泛应用 ,在此基础上发展起来的双光 1 实验方法和材料
子激光共焦显微镜已为生命科学的研究提供了有力的手
段[1 ,2 ] 。由于双光子的非线性激发特性所导致的空间高度局 rGFP 为 CLONTECH Laboratories , Inc. 产品。实验时 ,4 μ
g
域的特性 ,可以在没有共焦小孔的情况下获得高度清晰的三
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