响应面法优化胞外聚合物的提取方法.pdfVIP

第 27卷第 l期 安 徽 ：I= 程 大 学 学 报 Vo1．27．No．1 2012年 3月 JoumalofAnhuiPolytechnicUniversity M ar．。2O12 文章编号：16722～477(2012)01—0017-05 响应面法优化胞外聚合物的提取方法 倪 正，陶玉贵 ，王文强，秦昌云，徐艳秋 (安徽工程大学 生物与化学工程学 院，安徽 芜湖 241000) 摘要 ：以啤酒厂废水处理过程中的活性污泥为研究对象，采用 Box—Behnken没计及响应面法对 EPS的提取条 件进行优化 ，得到最优 EPS的提取条件为 pH值 7．1，温度 57。C，超声时间3min左右 ，超声波功率 37w．在 最优条件下 ，EPS的实际提取量为 153．446mg／gVSS． 关 键 词 ：活性污泥 ；胞外聚合物 (EPS)；超声波 ；响应面法 中图分类号 ：X172 文献标识码 ：A 胞外聚合物 (ExtracellularPolymericSubstance，EPS)是活性污泥中的微生物在一定环境条件下产生 的粘性物质Ⅲ ，这些粘性物质主要的来源有微生物细胞的新陈代谢、细胞的 自溶 以及微生物细胞对废水 中 有机物的吸收等等 ．蛋 白质和多糖是 EPS的主要成分 ，同时还含有少量的核酸 、腐植酸、氨基酸等 ． 对 EPS的成分及性质进行分析的一个关键 因素是 EPS的提取，而 目前关于 EPS的提取并没有一个统一 的方法嘲．EPS的提取原则是在低细胞死亡率的前提下最大程度地分离 出EPS．EPS的提取方法主要有 物理提取法和化学提取法 ．常用的物理提取方法主要有热提取法 、超声波法、高速离心法、蒸汽法等 ，常 用的化学提取方法主要有 EDTA法 、阳离子树脂提取法、甲醛提取法 、pH提取法等．同时，将 多种不同的 提取方法组合在一起能产生许多新的有效 的提取方法 ． 响应面法适用于解决非线性数据处理的相关问题 ]，可同时对多因素及其交互作用进行优化与评价， 并能快速有效地确定多因素系统的最优条件 ，因此，RSM 近年来广泛应用于多因素影响的试验条件优 化上 lo-123．本文主要以啤酒厂废水处理过程中的活性污泥为研 究对象 ，用响应面法对提取 EPS的条件进 行优化 ，确定最佳提取条件． 1 实验材料和方法 1．1 污泥来源及预处理 本实验采用的活性污泥取 自芜湖青岛雪花啤酒厂污水处理中心．取 3OmI曝气结束后 的活性污泥混 合液 ，在 4000r／min下离心 10min，倾去上清液 ，完成污泥的清洗及浓缩． 1．2 提取方法 将浓缩后的污泥丸重新悬浮于缓冲液 (pH-二7)中，进行超声处理 ，再水浴加热．将处理后的活性污泥 混合液在 4℃、12000r／min下离心 15min，所得上清液即为 EPS原液 ，提取的EPS原液经 0．45 m滤膜 真空抽滤 ，滤过的上清液注入截留分子量为 14000D的透析袋中(体积比为 1：10)，在4℃下透析24h，以 去除小分子物质的影响 ，试验结果均为 3次平行试验的平均结果．透析后的 EPS溶液在 4℃下冷藏待测． 1．3 分析方法 EPS的提取量用多糖与蛋 白质总和来表征，提取过程 中细胞破坏程度用 DNA含量来表征[n．其 中 多糖采用蒽酮法测定…]，蛋 白质采用考马斯亮兰 G一250法测定 ，DNA采用紫外分析法测定 ¨，VSS采 用标准方法测定 口 ． 1．4 EPS提取条件优化 采用响应面法优化 EPS的提取过程，采用 Box—Behnken设计原理对影响 EPS提取效果的 4个 因素 pH(X )、温度 (x )、超声时间(X={)及超声波功率 (x )在三个水平上进行优化 ，EPS提取量为响应值 收稿 日期 ：2011一O9一O2 作者简介 ：倪 正 (1985一)，男 ，安徽安庆人 ，硕士研究生 通讯作者 ：陶玉贵 (1965一)，男，安徽无为人 ，教授 ，硕导． ·18 · 安 徽 工 程 大 学 学 报 第 27卷 (y)，通过 SAS9．1软件对实验结果进行 回归分析 ，得到提取 EPS的最优实验条件，各 因素的水平见表 1．