盐酸胍消化法用于结核杆菌不同检样前处理及结果分析.pdfVIP

·。— — 1756 -·—— ChinJtabDi卿 ，November，2010，V0l14，No．1l 文章编号：1007—4287(2010)11—1756—02 盐酸胍消化法用于结核杆菌 不同检样前处理及结果分析 陈 曼 ，祝 绚 ，谭积善 ，胡启飞 ，吴民泸 ，段佳慧 ，代 娟 1，赖 翼1 (1．成都医学院医学检验系，四川 成都610083；2．成都市第九人民医院，四川 成都610015； 3．成都军区总医院，四川 成都610083；4．成都第一制药厂，四川 成都610504) 肺结核病是严重威胁人类健康的重大传染性疾 有凝块样品，37。孵育20min。加入 10ml无菌水混 病之一，是“单病因所致的感染性疾病中死亡率最高 合，室温 10min，5000—6000g，离心 15min，保留沉 的疾病”…，但只要能早期诊断合理用药，绝大多数 淀物。 的结核病人可以治愈。因此提高诊断阳性率和诊断 痰加2倍体积的盐酸胍消化液，漩涡 30s，加入 速度对于防治结核病具有重要意义[。现有的结核 10Hll无菌水混合，室温 10min，对有血污染、高脓性 病实验室诊断方法阳性率普遍较低 3『]。荧光定量 和粘液性的痰标本，室温多放置 10min，5000—6 PCR(FQ—PCR)能够快速检出结核杆菌，但是在不 000g，离心 15min，保留沉淀物。 同的样品中阳性率差异较大，特别是对于有污染的 其他 EDTA抗凝管收集胸腹水，防止凝块形成， 样品，常常发现有抑制现象_4j。本文通过 自制的盐 5000—6000g，离心 10min，然后沉淀物按照痰标本 酸胍消化液对样品进行处理，希望提高在不同样品 方式加工；乳状标本，25000g离心后，用一个无菌 中的结核杆菌的检出率，以期对肺结核病人的早期 棉试子除去脂肪，沉淀物用2倍体积的盐酸胍消化 诊断及治疗 。 液清洗 2次，然后用无菌水洗 ；很粘稠的标本，加入 1 材料和方法 2倍体积的盐酸胍消化液，漩涡混合，37。孵育 l5— 1．1 标本来源 收集成都医学院附属第一人民医 30min，加入 10ml无菌水，离心；脑脊液标本，25000 院、成都军区总医院和成都第九人民医院临床疑是 g离心，先用盐酸胍消化液清洗，然后水洗。所有标 肺结核病患者标本 185份，男 124例，女 61例，年龄 本离心后保留沉淀物。 在20—75岁之间。标本类型有痰液 、血液 、尿液、脓 1．4．2 显微镜检和培养 沉淀用 500 无菌水再 液、胸腹水、肺泡灌洗液和心包积液等。 悬浮，取 50 用于直接涂片镜检 ，另取 225 接种 1．2 主要仪器 中山大学达安基因股份有限公司 在 IJ_J培养基上。 生产的DA7600型实时荧光定量 PCR仪 。 1．4．3 DNA提取 225 l加入 1．5ml管中离心，20 1．3 主要试剂 000g，5min，加入 50 lDNA提取液 (试剂盒 自带)， 1．3．1 盐酸胍消化液 自制 (5mol／L盐酸胍 ，50 100~C恒温处理 10min后离心取上清 2 至PCR反 mmol／LTris—CIpH7．5，25mmolfLEDTA和 0．1otol／ 应管内。 一 巯基乙醇)。 1．4．4 FQ—PCR检测 将制备好的所有 DNA模板 1．3．2 结核分支杆菌 (TB)核酸扩增 (PCR)荧光检 与阴阳性对