芜菁夜蛾斯氏线虫G26侵染期幼虫cDNA文库的构建及表达序列标签分析.pdfVIP

n G 1 n I~BRICUUURAE 华 北农 学报 ·2008，23(6)：72·76 B0RI[ALI-SIHICA 芜菁夜蛾斯 氏线虫 G26侵染期幼虫cDNA文库的 构建及表达序列标签分析 马 娟 ，张军莒。‘，李秀花 ，李敏权 ，陈书龙 (1．河北省农林科学 院 植物保护研究所 ，}__J北省农业有害生物综合防治T程技术研究 中心 ，河北 保定 071000 2甘肃农业大学 ，甘肃 兰州 730070) 摘要 ：本研究以芜菁夜蛾斯 氏线虫 SteinernemafeltiaeG26的侵染期幼虫为材料 ，利用SMART(Switchingmechanismat 5，end0fRNAtranscrip[)技术 ，构建 了其 cDNA文库 ，得到原始文库的库容为3．7×10cfu／ml。随机挑取450个克隆，测 序获得 386条质量较好的序列，插入片段多在 0．3～3kb之间。将 EST序列进行 同源性 比对 ，EST中有注释信息的 占 95．92％，无注释信息的4．08％。蛋 白功能分析表明所得 EST包括核糖体蛋 白类 ，调节因子 ，信号传导相关基因，代谢 酶类等 。此全长 cDNA文库的构建成功，为阐明侵染期抗逆性幼虫形成与发育机制 以及抗逆代谢机理等提供 了重要 理论依据 。 关键词 ：昆虫病原线虫；SMART技术 ；cDNA文库 中图分类号 ：$432．45 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2008)06—0072—05 ConstructionofthecDNALibraryfrom IJsofSteinernemafeltiaeG26and AnalysisofExpressed SequenceTags MA Juan ，ZHANGJun—ge，LIXiu—hua ，LIMin—quan ，CHEN Shu—long (1．Institute。fP1antPmtecti。n，HebeiAcademy。fAgcuhureandForestrysciel1cesIPM，Centre。f HebeiProvince，Baoding 071000，China；2．GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou 730070，China) Abstract：Entomopathogenicnematodes(EPN)isanewtypeofbio—pesticidewhichhasgreatpotentialforcontrol— lingmanyimportantagriculturalpests．Theinfectivejuveniles(IJs)playanimportantroleinitscommercialization．A full—lengthcDNAlibraryfromIJsofSteinernemafeltiaeG26wasconstructedusingSMARTtechniques．Thetiterofpri— mary cDNA library was3．7×10 cfu／mL．Sequencingandsequencesimilaritysearcheswereperformed toanalyzethe profileofexpressedsequencetags(ESTs)．386qualifiedsequenceswereobtainedfroIn450clones，theinsertsizeranged from0．3—3．0 kb．ESTssequencessimilaritywascompared innon—redundanciesdatabaseofGenBank．Theresults showedthat4．08％ ESTshad [1onehomologyandthesewhichhadhighhomologyincludedribosomalprotein，translation elongationfactor，signaltransductiongene，metabolizeenzymeandSOon．Therefore，acDNA