FMDV非结构蛋白3A和3B的表达与反应活性分析.pdfVIP

2008年 12月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 43卷 第 6期 9～13 JOURNAL0FGANSU AGRICULTURALUNIVERSITY 双 月 刊 FMDV非结构蛋 白3A和 3B的表达与反应活性分析 付元芳 ，卢 曾军 ，曹轶梅 ，张小丽 ，郭建宏 ，刘在新 ，才学鹏 (1．甘肃农业大学动物医学院，甘肃 兰州 730070；2．中国农业科学院兰州兽医研究所 ，家畜疫病病原 生物学 国家重点实验室，国家 口蹄疫参考实验室，甘肃 兰州 730046) 摘要 ：根据 已测得 的O／China／99口蹄疫病毒 (FMDV)基 因组序列 ，设计两对特异性表达 引物，以带有 O／Chi— ha／99 3ABC基 因片段 的重组质粒 pGEM一3ABC为模板 ．扩增得到了3A、3B基因，通过两端的BamH I和 SalI酶 切位点插入原核表达载体 pET28a．将重组表达质粒转化宿主菌 BL21，用 IPTG诱导表达 目的蛋 白．表达产物经 SDS检测表明，3A和 3B基 因成功的在大肠埃希 氏菌中得到了表达；通过 Westernblotting分析和斑点 EuSA分析表明，纯化后的蛋 白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应． 关键词 ：FMDV；非结构蛋 白3A、3B；表达 ；活性分析 中图分类号：S852．65 文献标识码 ：A 文章编号：1003—4315(2008)O6—00O9一O5 Expressionandactivi,tyanalysiSof3A and3Bnon—structural proteinofFMDV inE．coli FU Yuan-fang ，LU Zeng-jun ，CAO Yi—mei。，ZHANGXiao-li， GUO Jian—hong。，LIU Zai—xin。，CAIXue～peng。 ． (1．CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070．China；2．KeyLaboratoryof VeterinaryPublicHealthofMinistry,ofAgriculture，StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology， NationalFoot—and—MouthDiseaseReferenceLaboratory，LanzhouVeterinaryResearchInstisute， ChineseAcademyofAgriculturSciences，Lanzhou730046。China) Abstract：Twopairsofprimersweredesignedforamplificationof3A and3Bgenesaecodingtothege— nomesequenceofO／China／99foot—and—mouthdiseasevirus(FMDV)．The3A and3Bgeneswereamplified frompGEM一3ABCbyPCR，andtheninsertedintopET一28avectorbytworestrictionsitesBamHIandSal I．TworecombinantplasmidsweretransformedintothehoststrainofE．coliBL21(DE3)pLysandthe targetproteinswereexpressedbyinducingwithIPTGat37一℃．Theexpressedproductsofthese3A and3B ge