双黄连注射剂中半抗原物质ELISA检测方法的研究.pdfVIP

江 西中医学 院学报2009年2月第21卷第 1期 JoU ALOFJIANGXIUNIVERSITYOFTCM 2OO9Vo1．21No．I Abstract：Objective：TostudythedetectionofhtesemiantigenicsubstanceofShuanghuanglina Injcetion．Methods：Topreparecomplete antigenbyincubationofShunaghuanglianInjectionandbloodserumofnormalanimalinvitro，hteanimalwasimmunedtogethtespe- cificantibodythataimsdirectlyathteaJlergiaincompletenati~nofShuanghunaglina Injection．Results：Thepotencydetectedbytwo— siteELISA assaydemonstratespo sitiveuntilhteserum dilutedto128folds，esrologicalspecificitydetectedbyhteindirectcompetitive inhibitionelisatodrawrestraincurveaccordingtohteoptimiumconditions，nadhteregressionequationWlit8I=13．362lgc+50．503， coefficientcorrelation，r=0．9663，detectionlimitWills0．93p~／ml，halfihn ibitingconcentrationICSO=0．92ms／m1．Conclusion：Th is mehtodcanbeusedwellinhtedetectionofesmiantigenicsubstanceofshuangl1u锄glina Injection． Keywords：Shunaghuanglina Injection；incompletenatigen；ELISA 双黄连注射剂是由金银花、黄芩、连翘提取精制 用化学偶联的方法与蛋白质等大分子物质合成完全 而成的针剂，有粉针剂和注射液两种剂型，具有 良好 抗原后免疫动物制备特异性抗体，再利用免疫分析 的抗病毒作用…，常用于治疗病毒和细菌引起的感 技术进行检测 4【J。但双黄连注射剂中引起过敏反 染L2J。但由于双黄连注射剂为复方制剂，成分较为 应的半抗原物质尚不明确，无法采用化学偶联的方 复杂，其中某些小分子物质 (如绿原酸)或其代谢产 法制备完全抗原，故本实验模拟双黄连注射剂进人 物作为半抗原与体内血浆蛋白结合形成高致敏原， 体内后的致敏过程，将双黄连注射剂与正常兔血清 诱发皮疹、药热、过敏性休克等变态反应，占双黄连 体外孵育制备完全抗原，免疫雄性新西兰兔获得针 注射剂临床不良反应的75％L3]。 对双黄连中过敏性半抗原的特异性抗体，建立了双 对于分子结构明确的单一小分子半抗原，多采 黄连中半抗原物质的ELISA检测方法，为进一步研 十基金项目：江西省卫生厅基金资助项目(2007A024) 通讯作者：徐国良，Tel：0791—7118657；Em‘ail：xugu。liang6606@126．com · 39 · 江西中医学院学报 2009年第21卷第 1期 究双黄连注射剂中过敏性物质奠定了基础。 至 1000ml；2％BSA：2gBSA用 100ml0．15mol／L 1 材料和方法 pH7．4磷酸盐缓冲液溶解 ；PBST：0．05mlTween-20