漆酶固定化及其性质的研究.pdfVIP

《广州食品工业科技》 Guangzhou Food Science and Technology Vol.20 No.2(总80) 中图分类号：Q5；文献标识码：A；文章篇号:1007-2764(2004)02-0006-03 漆酶固定化及其性质研究 李冬生 康旭 杨红 (湖北工学院生物工程学院,武汉 430068) 摘 要：本文就漆酶的固定化及固定化酶的性质作了初步研究。利用明胶和海藻酸钠的聚合作用与海藻酸钙凝胶球的包埋作用 制备固定化漆酶。结果表明：固定化酶米氏常数Km 为12.0mg/ml，游离酶米氏常数Km 为7.0mg/ml，固定化酶最适温度为40，游 离酶为30 ，同时固定化酶明显提高了游离酶的耐热性、储藏稳定性和操作稳定性。 关键词：漆酶；固定化；稳定性 漆酶(Laccase，E.C.1.10.3.2)是一种糖蛋白酶，1883 涤后，固定化酶被贮存在 0-5℃冰箱中准备在实验中 [1] 年由Yoshida 在漆树生漆中发现 。由于它具有相当宽 使用。 泛的底物专一性和较好的稳定性，漆酶在废水处理、 1.3.2 漆酶的活力测定6 生物漂白、芳香化合物转化、生物传感器构建等方面 漆酶活力测定：10mL 反应液中含5mmol/L 琥珀 [2] 具有重要应用价值 。目前，有许多资料也谈到了漆 酸钠缓冲液(pH4.5)1mL，4mmol/L 愈创木酚 1mL 和 酶在食品加工中的应用，如漆酶在饮料加工、食药用 0.5mL 酶液。30℃反应30min 后，于465nm 处测定吸 菌生产、食品分子交联、植物食品保护等方面有重要 光度，以酶液事先灭活后的反应混合液为对照，以 [1,3] 作用 。固定化技术就是近年来迅速发展的一种崭新 1min 内催化氧化1nmol 愈创木酚的酶量为1个酶活单 技术，把固定化技术应用到酶制剂行业是该行业生产 位(u) 。固定化酶酶活测定反应体系同游离酶，取1mL 和使用酶制剂的又一次革命。固定化酶同游离酶相比 固定化酶悬浮液与底物混合，均匀搅拌反应 30min， [5] 有很多优点，它开辟了酶的许多新用途 。本文就漆 离心后取上清于465nm 处测光吸收值。 酶的固定化及固定化酶的性质作了初步研究。 2 结果与讨论 1 材料与方法 2.1 漆酶的固定化 1.1 材料 2.1.1 固定化机理 漆酶(漆酶产于白腐菌Panus conchatus ，经硫酸铵 海藻酸钠是糖醛酸的钠盐聚合物在酸性条件下可 沉淀分级、超滤、离子交换、脱盐等纯化步骤得到)； 形成凝胶，明胶是一种多肽聚合物，在一定pH 条件 明胶、海藻酸钠、氯化钙、戊二醛等为分析纯。 下，带正电荷的明胶与海藻酸根阴离子形成聚合物， 1.2 仪器：磁力搅拌器；酸度计；恒温水浴锅等 同时海藻酸钠与钙离子在一定条件下结合形成不溶于 1.3 方法 水的微球从水中分离出来。戊二醛含有二个醛基，可 1.3.1 漆酶的固定化4,5 与蛋白质中的氨基、酚基、巯基发生Schiff 反应，相 将酶液15ml 与3%的海藻酸钠溶液150ml 混合搅 互交联而使固定化酶硬化，由于正电荷的明胶与海藻 拌，然后加入3%的明胶溶液150ml 均匀混合约10min， 酸根阴