调中颗粒对反流性食管炎大鼠食管黏膜P物质、一氧化氮合酶和血管活性肠肽的影响.pdfVIP

于脾失健运、胃失摄纳而出现的中焦运化失司，机体失于充养所表现的症候，多由于思虑过度、劳 倦内伤、饮食失节等所致。其病理基础主要是“正气虚弱，脾胃运化失司”，故该证型胃电图表现以 振幅降低、胃电节律过缓为著。 本课题研究由于时间短，收集病例偏少，且入选标准偏低、具有一定的局限性，(只对福州及周 边地区的人群做了调查，且少数患者脾胃湿热证的分级标准很难严格按照诊断标准进行)，这些因素 可能对研究结果产生一定的影响，今后需扩大观察样本，进行更细致的研究。 调中颗粒对反流性食管炎大鼠食管黏膜P物质、 一氧化氮合酶和血管活性肠肽的影响 时昭红张介眉郝建军 武汉市中西医结合医院消化内科(湖北武汉430022) 调中颗粒(原名胃必欢)是已通过省药监局院内制剂审批(批准文号：鄂药制字2005第z01．112 号)，’在临床运用20余年的治疗反流性食管炎的中药制剂。本研究以大鼠胃十二指肠反流性食管炎 intestinal 为模型，测定了食管下段组织中血管活性肠肽(vasoactive P，SP)和一氧化氮合酶(nitricoxide synthase，NOS)的水平，探讨其防治反流性食管炎的作用机 制。 1．材料 1．1实验动物 (合格证号：19．058，编号：TⅡ．A．2005．308)。 1．2药物及试剂 的溶液。 半夏泻心汤(半夏129、黄芩、干姜、党参、炙甘草各99、黄连39、大枣4枚)(制备成浓度 博士德生物工程有限公司提供。 1．3主要仪器 BX．50 显微摄影系统：美国Palarod 技术有限责任公司提供。 2．方法 2．1分组及喂养 将大鼠随机分成5组：调中颗粒组、半夏泻心汤组、西沙必利组、空白模型组、正常对照组， 一417— 每组8只，分笼饲养于钢丝网底塑料笼内，每笼4只，每组2笼。每天自食足量颗粒饲料。实验动 物观察室为开放式，温度、照明、噪音、换气等条件控制在规定范围内，每天定时清洁动物房。 2．2造模方法 造模选用王雯等的食管十二指肠端侧吻合术法：将上述大鼠用1％戊巴比妥钠麻醉(30mg／kg腹 腔注射)后固定于手术台上，取上腹部正中切口进腹，进腹后将食管下段分离出神经和血管，结扎 贲门，切断食管，分离并分别结扎胃周血管，十二指肠残端结扎并菏包包埋于胃中，保留全胃。于 距残端约lcm处纵行切开十二指肠壁约0．5cm与食管下段行食管十二指肠端侧吻合术。关腹前腹腔 内注入生理盐水lml，及硫酸庆大霉素2万IU。术后禁食24h，不禁水。观察大鼠饮食、粪便及活 动情况，每周测定体重。 2．3给药方法 西沙必利(O．099／kg·d)，正常对照组和空白模型组给予同体积的生理盐水灌胃，日二次，共给药 12天。 2．4检测指标及方法 2．4．1取材方法 给药结束后禁食不禁水．12h，将各组大鼠断头处死，取食管下端的大小约为0．5cmx0．5cm食管 壁全层一块，立刻置于4℃4％的多聚甲醛中固定2h，备免疫组化用。 2．4．2免疫组化步骤 la 标本固定后，石蜡包埋，切片厚度为6 m，常规脱蜡至水；用3％H202，室温5．10分钟以灭 活内源性酶。蒸馏水洗三次；将切片浸入0．01M枸橼酸盐缓冲液(PH6．0)，电炉加热至沸腾后断电， 间隔lO分钟后，反复1．2次。冷却后0．1MPBS洗涤2次；滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。 PBS洗2分钟X3次；滴加生 甩出多余液体，不洗；滴加适当稀释的兔抗IgG，4℃冰箱过夜。0．1M 0．1M 滴，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反应时间30分钟；苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。 显微镜观察。 2．4-3观察指标 染色结果判定标准：SP及VIP、NOS阳性纤维呈深黄色或棕黄色