微小RNA-125b过表达对卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用.pdfVIP

中国妇产科临床杂志 2014年 9月 第 15卷 第 5期 ChinJClinObstetGynecol September 2014，Vo1．15，No．5 ·391 · · 论著 · 微小 RNA一125b过表达对卵巢癌 SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用 王华 吴维光 王筝 闫洪亮 王迎春 【摘要】 目的 通过在人卵巢癌 SKOV3细胞中转染微小 I A一125b (miR一125b)真核表达质粒 ，探讨 miR一125b过表达对 SKOV3细胞失巢凋亡的作用及可能机制。方法 针对miR一125b基因序列设计并合成两条 寡聚DNA片段 ，并克隆入pSilencer2．1一U6一neo质粒中，脂质体法将重组质粒转染人卵巢癌sK0V3细胞。定 量PCR方法检测 miR一125b，以及 BDNF和 TrkB基因mRNA表达；Westernblot检测BDNF和 TrkB蛋白表 达；体外侵袭模型检测细胞侵袭能力 ；失巢凋亡模型及流式细胞术检测细胞失巢凋亡。结果 成功构建miR一 125b真核表达载体并转染人卵巢癌 SKOV3细胞，SKOV3细胞miR一125b表达增加；同时BDNF和TrkB基因 m_RNA和蛋白表达均降低；穿透Matrigel膜的细胞数减少 ；细胞失巢凋亡增加。结论 miR一125b基因过表达 能够诱导人卵巢癌 SK0V3细胞失巢凋亡和抑制细胞侵袭能力 ，抑制BDNF／TrkB途径可能是其作用机制。 【关键词】 卵巢癌；微小RNA 125b；失巢凋亡 ；BDNF／TrkB途径 OverexpressionofmicroRNA 一125bonanoiMsresistanceinhumanov~u-Jan~JlcercelllineSKOV3 WANG Hua，WU Weiguang，WANG Zheng，YAN Hongliang。WANG Yingchun． (DepartmentofObstetricsandGynecology，A{{liatedHospital，LogisticalCollegeofChinesePeopleS ArmedPoliceForces，Tianjin300162，China) [Abstract] Objective TotransfecteukaryoticvectorexpressingmieroRNA—‘125b(miR——125b)intohuman ovariancancerSKOV cells。toobservetheeffectsofoverexpressionmiR一125bonanoikisandtoinvestigatethepos— siblemechanism．Methods TwoDNA templatesweredesignedbasedonmiR一125bgenesequenceandclonedinto pSilencer2．1一U6 一neovector．Theresultantplasmid wastransfected into SKOV3 cellswith Lipofectamine 2000．ThemiR一125b，mRNA ofBDNFandTrkBweredetectedbyrealtimePCR．TheproteinofBDNFandTrkB weredetectedbyW esternblot．Transwellcabinassaywasperformedtomeasuremetastasis．Theanoikismodeland flow cytometrywereusedtOmeasuredanoikisapoptosis．Results TheplasmidofmiR一125bwassuccessfullycon— structedandtransfectedintoSK0V3cells．TheexpressionofmiR一125binSK