点电极电介质电泳地研究.pdfVIP

点叟摄琏捡质电泳的研究 曾群力 浙江医科大学微波研究室杭州310031 摘要：本实验研究了点电极的电介质电泳，发现点电极的电介质电泳比平行丝电极有 更大的优越性，细胞能在较高的离子浓度(即高电导翠)缓冲液中进行电介质电泳，有 利于细胞成活，并形成合适分布的“璇链”，其成串率高达80％P_／上，同时，点电极的袁 观电阻高，对A．C电源要求降低．结果表明，点电极系统具有相当好的实际应用价值． 一、引言 U．Zimmermann将缅胞电介质电泳引入细胞电融合法。用细胞电介质电泳实现的细胞间接 触，具有操作简单，无化学毒性，刭细胞损伤小，可在显徽镜下观察，融台同步，融合 频率高等优点。以往的平行丝或平行板电极电介质电沫存在许多缺陷，如无法解决双亲 本细胞闻的特异配对问题，限制了外界藩液的缓冲能力和离子浓度，细胞长时间暴露其 中也会受到损伤等。为解决这些问题，本实验考查了细胞在点电极电场中形残“珠链” 的备种条件，如电场强度、频率、离子浓度、电导率等．并测定了有关的参数。 二．材料与方法 本实验角甘露醇、蔗糖、组氨酸、磷酸盐、醋酸钙和醋酸镁组成不同的融台介质PMI-6 注入自制的电极小池中，用XDl信号发生器提供交流电源，／212积踪示波器监测电压和 频率，用电导率仪进行硎液的电导辜测定。将小鼠骨髓瘤细胞Ns—l配制成一定浓度注 入小池，加压屠，在倒置显微镜下观察不同电场强度、频率，离子浓度、电导率等条件 下细胞的成串情况。 三、结果与讨论 1．溶液条件的影响 著且成串恢而密．而以磷酸盐作缓冲被，其他条件一定时，我们发现磷酸盐浓度越低， 戚串所需时间越短，每串细胞数多，易堆积于电极上，各细胞串之间相互靠近过于密集． 磷酸盐浓度高时，现象反之．经过多次实验，我们发现磷酸盐浓度范围为10一30mM时成 串效果最佳。由电化学理论可知，溶液的导电能力与溶液离子浓度成正比，一般来说， 细胞的聚集作用随溶掖电导率的降低而升高。由电介质物理的边界极化理论可知：当电 导率。下降时．电介质的复介电常数将丹高，导致周围介质和粒子的相对介电系数之差 l￡，～E。5增大．则中性粒子在非均匀电场中所受作用力也随之增大，便缅胞向电场梯度 大的地方聚集。另一方面．当离子浓度升高时．。升高，导致KT升高，粒子的布朗运动 加剧，扰乱了细胞的有序运动，从而影响成串。因此，高离子浓度溶液甲细胞的成串现 象不直口低离子浓度搐液中的显著。 2．颤率条件的影响 部有较明显的现象出现，而旦频率越高，成串所需时问越短，但珠串分布不理想。同样， 从电升质物理学的角度来看，介质可分为出极性和j；极性分子组成的两娄。在外加电场 中．前者将产生永久偶极矩，后者可产生感应偶极矩，从而使介质极化。毫交变场中， 由于各和极化(取向极化、离子极化、电子极化)的霆立时间不同，丹质的介电常数就不 仅取决子介质车身的结构葡温度，而且还与外加坜的时间变化率有关。赦当f很高时， 缅胞的离子极化作用小，所引起的僵极偶极相互作鬲减弱，故纽胞成串密集在电极周围， 且每串的细胞数少，多为2-3个。低顿时，由子缨胞的取向极化和空间电荷极化易于保 持．j{极褶互作用明显，表现出钼互罨拿质电泳的优势。就本实验而言，在办[压20-30 君b中成串阻60KHz-600KHz为最佳。 3．电场强度的影响 要形成稳定的细胞串，必须选择适当的交流电场的场强，使得电场的定向力大于热 是园为电场过高，会引起膜的击雾和对细胞功能的干扰。同时高场强也会引起较大的电 流，导致涡漩现象。另一方面，舟质的极化与场强成正比，较低的场强不利子介质的极 化，会减弱细胞的偶极相互作用，不易形成环串。离子浓肇增高，郾溶液的导电翠增大， 导致I。。一￡。l下隆，同时KT升高，必须提高E，才能满足细胞戒串的条件。故高离子浓 度的缓冲渡所需的最佳场强比低离子浓度缓冲液要高。 4．其他条件的影响 ①温度：细胞电介质电河、中细胞主要受到电场力的作用而沿电力线排列戚串，但布 瓤运动却对这种作用产生干扰。布朗运动随温度的升高而加剧，为此，我们用冰浴法将 细胞降温至o℃，便成串率有所提高。②时间：用磷酸盐缓冲液的细胞悬浮液，一般加 压3秒时就有细胞串出现，5秒时育沿电力线排列的细胞串出现。磷酸盐浓度越低，成 串时间越短，一般在加压30砂左右嵌