人血浆中甲氨蝶呤的高效液相色谱法测定及其代谢物的质谱定性分析.pdfVIP

药学实践杂志 2015年 3月 25日第 33卷第 2期 JournalofPharmaceuticalPractice，Vo1．33，No．2，March25，2015 143 · 论著 · 人血浆 中甲氨蝶呤的高效液相色谱法测定及其代谢物的质谱定性分析 王漪璇，毋 丹，曹军宁，钱 隽 (复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032) [摘要] 目的 建立 固相萃取一高效液相色谱法测定人血浆 中的甲氨蝶呤浓度 ，用于临床治疗 的监测 ，并通过质谱对 甲 氨蝶呤的人体代谢物进行定性分析。方法 血浆样本经C 固相萃取小柱净化洗脱后直接进样，以DiamonsilC-s分析柱 (150mm×4．6mm，5m)分离，流动相为甲醇和0．5 乙酸溶液(含 0．3 三 乙胺)，采用梯度洗脱 ；流速为 1．0ml／min；紫外检 测波长为 306nm。通过质谱全扫描(QLMS)和多反应监测一信息关联采集一增强子离子扫描 (MRM—IDA—EPI)获得甲氨蝶呤代 谢物 的质谱信息。结果 甲氨蝶呤在 0．05～100~,mol／I范围内线性关系 良好 (r一0．9999)，提取 回收率95 ，准确度在 97 ～105 之间，日内与 日间精密度(RSD)均5 。分析 甲氨蝶呤代谢物 的质谱信息，推断该代谢物为 7一羟基 甲氨蝶呤。 结论 本方法灵敏度高、重现性好、操作简便，适用于 甲氨蝶呤的血药浓度监测。 [关键词] 甲氨蝶呤 ；高效液相色谱法；固相萃取；代谢物 [中图分类号] R917．1 [文献标志码] A [文章编号] 1006—0111(2015)02—0143—05 [DO1] IO．3969／j．issn．1006—0111．2015．02．013 Determ inationofmethotrexateinhumanplasmabyHPLC andqualitativeanalysis 0fitsmetabolitebymassspectrometry wANGYixuan，WU Dan，CAO Junning，QIANJun(DepartmentofMedicalOncology，CancerHospitalAffilliatedtoFudan University；DepartmentofOncology，ShanghaiMedicalCollege，FudanUniversity，Shanghai200032，China) -[Abstract] 0bjective TodevelopanSPE—HPLCmethodforthedeterminationofmethotrexate(MTX)inhumanplasma tomonitortheclinicaldruguseofMTX ，andtoidentifythehumanmetaboliteofM TX bymassspectrometry．M ethods MTX wasextractedfrom humanplasmausingC】8SPE columnandanalyzeddirectlyafterelution．TheseparationofMTX wasper— formedonDiamonsilCl8column (150mm ×4．6mm ，5m)withagradientmobilephaseofmethanoland0．5 aceticacidsolu— tion (containing0．3 triethylamine)ataflowrateof1．0ml／min．Thedetectionwavelengthwas306nm．QIMSandMRM— , IDA—EPIscanmodeswereused to obtain themassspectrum ofMTX metabolite．Results Thecalibration curveofMTX in plasmawaslinearovertherangeof0．05—100／,otol／L(r一0．9999)．Theextractionrecoverywasabove95 andaccuracywas between97 and105V0。Bothintra—andinter-dayprecisionwerelessthan5 ．7-OH MTXwasidentifiedtobethemetabolite throughtheanaly