内耳注入携带 IL -4基因的骨髓间充质干细胞对豚鼠免疫性内耳病基因治疗的研究.pdfVIP

494 JournalofAudiologyandSpeechPathology2014．Vol22．No．5 实验 弱怒 内耳注入携带 IL一4基因的骨髓间充质干细胞 对豚 鼠免疫性 内耳病基 因治疗的研究△ 郭浪 谭长强 刘树森 江萍 衡伟伟 【摘要】 目的 研究内耳局部植入 白细胞介素 4(IL～4)基 因修饰骨髓间充质干细胞 (bone—marrowmesen— chymalstem cells，BMSCs)对免疫性内耳病豚鼠内耳病理损伤和听功能的调节与治疗作用 。方法 采用钥孑L喊血 蓝蛋 白(KLH)抗原在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫 ，制成豚 鼠免疫性 内耳病模型 55只，分为五组 ：A组 (BMSCs 载体组)、B组 (BMSCs空载体对照组)、C组 (重组慢病毒 IL一4基因组)、D组 (慢病毒空载体对照组)及 E组 (模拟 手术对照组)，每组 11只，各组均将相应 的悬液 20tAEBMSCs悬液 中含 BMSCs(1．5～2．0)×10。，慢病毒浓缩液浓 度为 0．5×10。pfu]经鼓阶开窗植入 内耳 。采用免疫荧光组织化学试验法 、免疫酶组织化学试验法观察 IL一4基 因 产物在 内耳组织结构 中的分布和表达情况 ，酶联免疫吸附试验观察血清抗 KIH特异性抗体水平 ，ABR测试听功 能变化 。结果 与免疫前相 比，免疫后 A、B、C组 ABR波Ⅲ阈值不 同程度降低 ，A组阈值 降低更 明显，差异有统计 学意义 (PO．05)；免疫组织化学染色显示 BMSCs荧光反应 阳性细胞主要分布在鼓阶、前庭阶；内耳光镜观察 A、 B、C组仅在鼓阶内有絮状物，注射部位有少量红细胞和 白细胞，D、E组可见不同程度的膜迷路积水，螺旋神经节和 蜗轴小血管周 围有单个核细胞浸润 。结论 重组 IL一4基 因的慢病毒载体可在体外成功转染 BMSCs，经鼓阶途径 植入 内耳后可在 内耳迁移并产生基 因产物 IL一4，可明显减轻免疫性 内耳病动物的 内耳免疫炎性反应和听功能损 伤 ，而 BMScs可 以作为细胞载体把携带有 目的基因的治疗因子迁移到损伤部位而发挥治疗作用。 【关键词】 骨髓间充质干细胞 ； 白细胞介素 4； 慢病毒 ； 免疫性 内耳病 ； 基 因治疗 DOI：10．3969／j．issn．1006—7299．2014．05．011 网络出版 时间：2014—5—2O 15：47 网络出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．3969j／．issn2014．03．0．html 【中图分类号】 R764．3 【文献标识码】 A 【文章编号】 1006—7299(2014)05—0494～06 GeneTherapyofInnerEarInjectionwithBone--MarrowMesenchymalStemCellsDecorated with Interleukin-- 4Geneon lmmune— MediatedInnerEarDisease inGuineaPigs GuoLang ，TanChangqiang，LiuShusen，JiangPing，HengW eiwei ( DepartmentofOtOlaryng0IOgy，InstitudeofStomatologyHospital， NanjingUniversity，Nanjing，210008，China) [Abstract] Objective Toevaluatethegenetherapeuticeffectsofguineapigsmodelwithimmune——mediated innereardisease(IMIED)after1ocallyinjectionofbone--marrowmesenchymalstem cells(BMSCs)decoratedbyin— terleukin-- 4