加味左金丸对胃癌前病变大鼠胃粘膜癌基因+EGFR、VEGF、C-met、Bcl-2蛋白表达影响.pdfVIP

加味左金丸对胃癌前病变大鼠胃粘膜癌基因 湖北省中医院消化内科(430061)胡运莲李天望童昌珍‘ 癌变过程不仅存在细胞增生异常，而且也存在细胞凋亡异常．细胞增生与凋亡是受基因控制的， 原癌基因的激活是其重要原因。原癌基因产物表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子(VEGF)、 报道，但4个同时研究的报道尚未见。加昧左金丸是全国第二批名老中医药专家程丽芳教授的经验方， 原汤剂临床应用30余年，治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变疗效肯定．先期通过动物实验证实加味左金 蛋白表达情况及加味左金丸对其影响以探讨其可能的治疗机理。 l材料与方法 · 1．1主要药品、试剂及仪器 一次，I}％用时用取蒸水配成所需浓度；脱氧胆酸钠购自湖北省医药公司：维甲酸由上海第六制药厂 生产；雷尼替丁由杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药有限公司生产；75％乙醇，用双蒸水稀释成40％的浓 制剂室供给，浓度为29／ml。 ． 多克隆抗体，DAB即用型显色试剂盒，均购自北京中山生物技术公司。全自动图像分析仪由武汉大 学医学院病理教研室提供，软件为同济千屏影像工程公司lIPIA$2000型阔像分析软件。 1．2造模及给药方法 参照严茂祥…综合造模方法并加以改进。大鼠自购进后适应性喂养l周。从60只大鼠中随机抽取L0 只作为正常组，其余50只用于造模。正常组大鼠不做任何处理。遗模大鼠自购进的第2周起每日自 随机抽取正常组和造模大鼠各一只，杀检，观察组织病理学变化(以腿染色光学显微镜下观察的结 果为主)，确认模型是否成功． 模型成功后，将造模存话的43只大鼠随机分为自然恢复组11只，维甲酸组8只，加味左金丸 高，中、低剂量组(简称高、中，低剂量组)各8只．高剂量组每日每只按209／kg(相当于成人一 于成人一日用量的一半)灌胃．维甲酸组按40mg／kg灌胃．上述治疗16周。自然恢复组同正常组大 鼠常规饮食．如周末所有动物禁食1d，处死。剖腹取胃。沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗．肉眼观察， 平铺于硬纸板上。于胃窦部剪取组织l块，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片5um，免疫组织化学 染色． 1_3检测方法 PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照．免疫组化染色阳性为棕色或黄褐色。EGFR 显微摄像计算机图像分析系统．数5个以上高倍视野。不少于1000个细胞。 EGFR“‘染色结果以阳性百分率表示，并根据染色深浅和阳性细胞百分数，将阳性强度判为(+)弱 (+++)：阳性细胞数为60％。C-met…阳性细胞按如下方法统计，(一)：无阳性细胞或阳性细胞30％： 阳性细胞按如卜．方法”1统计：10％为阴性，≥10％定为阳性． 1-4统计学处理方法 计数资料采用均采用x2检验，等级计数资料采用ridit分析。 2．结果 (1)各组大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达见表I 表1 EGFR蛋白表达比较 注：①实验结束时自然恢复组共死亡6只．未列入统计。②与自然恢复组比，AP0．05，● P0．01，◆P0．05；各治疗组(高中低)与维甲酸组比，★P0．05 正常大鼠胃窦粘膜即有EGFR蛋白表达，主要分布在靠近腺体基底部的增殖细胞中，呈弥漫性胞 浆表达。加味左金丸各治疗组EGFR蛋白阳性例(率)与自然恢复组比较差异有统计学意义(中剂量 义(P0．05)。 (2)各组大鼠胃粘膜VEGF蛋白表达见表2 表2 VEGF蛋白表达比较 组别 总例数 P ++ +++ 阳性例数(率) 正常组 9 9 0 0 0 0(0) 自然恢复组 5 0 3 2 0 ． 5(100％) 维甲酸组 8 6 2 0 0 2(25％)‘ 。 高剂量组 8 5 3 0 0 3(37．5％)” 中剂量组 8 7 l 0 0 l(12．5％)“ 低剂量组8 6