自杀基因系统联合六味地黄丸对肝癌细胞杀伤的协同作用.pdfVIP

维普资讯 2008年7月第25卷第4期 广州中医药大学学报 Julv2008．VoL25．No．4 JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine 319 文章编号：1007—3213 (2008)04—0319—06 自杀基因系统联合六味地黄丸对肝癌细胞杀伤的协同作用 杜标炎 ， 张爱娟 ， 谭宇蕙 ， 易 华 ， 吴映雅 (1．广州中医药大学基础医学院，广东广州 510405；2．广州中医药大学 2005级硕士研究生，广东广州 510405) 摘要： 【目的】观察六味地黄丸含药血清协同HSV—tk／GCV自杀基因治疗系统杀伤大鼠肝癌CBRH7919细胞的作用，探讨建 立 自杀基因联合中药方药的肿瘤基因治疗联合方案的可行性。 【方法】构建HSV—tk／GCV自杀基因治疗系统，确定丙氧鸟苷 (GCV)工作浓度 (392ixmol／L)；选用SD大鼠灌 胃制备六味地黄丸含药血清和空白血清，并观察含药血清和空白血清对 肿瘤细胞生长的影响。设空白对照组、GCV对照组、自杀基因治疗对照组，以上3组均为无大鼠血清的对照组。空白血清 组、GCV加空白血清组、自杀基因系统加空 白血清组、含药血清组、GCV加含药血清组、自杀基因系统联合含药血清组 中，所有大鼠的空白血清和含药血清再分为体积分数5％和7．5％2种浓度，每组设6个复孔。将大鼠肝癌细胞CBRH7919／ 和 CBRH7919／tk一混合。使 细胞的比例分别 占0％、5％、10％，按 3×10 个／孔细胞分别接种到96孔板，用完全培 齐基培养细胞24h后，相应加入体积分数5％或7．5％的大鼠空白血清和含药血清，孵育12h，加入GCV，培养60h，四甲 基偶氮唑盐 (M1Tr)法检测细胞存活率，用Q值 (实测药效与理论药效的比值)分析 自杀基因系统与含药血清联合的相互 作用是否具有协同性 (0．85≤Q1，15为相加作用，Q≥1、15为协同作用)。 【结果】空白血清和含药血清浓度在体积分数 20％以下时未显示明显细胞毒性 ；血清浓度为体积分数5％和7．5％时，自杀基因系统联合含药血清组与单独含药血清组及 自杀基因系统加空白血清组比较，联合组对肿瘤细胞的杀伤作用均强于其他非联合组，细胞存活率均有显著性差异 (P 0．01)，而且 自杀基因系统联合含药血清的作用具有明显的协同性 (Q1．15)。 【结论】HSV—tk／GCV 自杀基因治疗系统联 合六味地黄丸对杀伤肿瘤细胞具有协同增效作用。 关键词 ：肝肿瘤／中西医结合疗法； 六味地黄丸／药理学； 基因疗法； 自杀基因； 肿瘤细胞 ，培养 中图分类号：R285．5 文献标识码 ：A 原发性肝癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，传 治疗具有增效作用 m。本研究拟通过体外实验 统的肿瘤治疗方法对原发性肝癌治疗效果欠佳。自 作进一步地论证，现报道如下。 杀基因治疗，可能在控制肿瘤的增殖、预防和延缓 复发与转移，以及提高患者生活质量方面具有独特 1 材料与方法 的优势，成为肝癌治疗活跃的研究领域 I4。单纯 1．1 主要试剂与仪器 自杀基因治疗难以达到完全根治肿瘤的目的，需要 RPMI-1640为Gibco公司产品；新生牛血清为 通过各种方法进一步提高疗效。联合治疗是提高 自 TBD公司产品；四甲基偶氮唑盐 (Mr丌)、丙氧鸟 杀基因治疗疗效的方法之一，目前国外的联合治疗 苷 (GCV)、二甲基亚砜 (DMSO)为美 国Sigma 方案主要包括联合免疫基因或联合放疗、化疗 公司产品；细胞培养瓶、培养板、冻存管、滤膜等 等 。但 由于各种原因，上述联合治疗方案未能 均为美 国Corning公司或丹麦 NUNC公司产 品； 取得预期的理想效果。 BNA-3210型CO2培养箱 (日本 ESPEC)；超净工 临床与实验研究均已证明许多中药方药具有广 作台 (苏州净化设备厂)；高速冷冻离心机 (德国 泛的药理作用 ，且具有多途径和多靶点的