人参白虎汤对实验性糖尿病大鼠周围神经病变的影响.pdfVIP

糖尿病周围神经病变是糖尿病在神经系统发生的多种病变的总称，是糖尿病三大并发症之 一，发病率较高，在糖尿病发病早期即可出现。本病多累及股神经、坐骨神经、正中神经、桡 神经、尺神经、腓肠神经及股外侧皮神经等。早期症状以感觉障碍为主，但电生理检查往往呈 运动神经及感觉神经均有累及。 前期研究表明，人参白虎汤可降低糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白与红细胞山梨醇，升高 SOD 活性，降低 MDA 含量，有较好的降糖作用[1] 。本研究将探讨其对周围神经病变的治疗作 用。 1 实验材料与仪器 1.1 实验材料 动物：雄性清洁级 SD 大鼠，体重 220± 15g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供， 合格证号：SCXK11-00-0008。 药物与试剂：所用中药材均购自北京卫仁中药饮片厂，人参白虎汤按原方比例（知母 18g， 石膏 30g，甘草 6g，粳米 12g，人参 9g ）水煎2 次，过滤浓缩至所需浓度，4 ℃保存备用；格列 齐特由南昌弘益科技药业有限公司生产，批号：090922 ；四氧嘧啶为 Sigma 产品，批号：910508； 1.2 实验仪器 UV-120-02 型紫外可见分光光度计（日本岛津）；AA020016 型荧光分光光度计（日本）； GS-15R 型低温离心机（美国 Beckman ）；SEN3201 型电刺激器（日本光电公司）；VC-10 双道记 忆示波器（日本光电公司）；生理数据记录系统Mac/Lab400 ，（澳大利亚ADI 公司）；CH-2 型光 学显微镜（日本 OLYMPUS ）。 2 实验方法 2.1 糖尿病模型的建立[2] 大鼠按 200mg/kg 尾静脉注射四氧嘧啶，正常饲养 72h 后，隔夜禁食，不禁水，测定空腹血 糖，空腹血糖11.1mmol•L-1 的大鼠为造模成功。 2.2 分组与给药指标测定 大鼠按血糖及体重随机分为模型对照组、人参白虎汤高(15 g/kg BW)、中(7.5 g/kg BW)、低 小剂量组(3.7 g/kg BW)和二甲双胍组(0.15g/kg BW) 。另取 10 只正常大鼠做为正常对照组。各给 药组按照上述剂量以 10ml•kg1 体重的体积灌胃给药，正常对照组和模型组灌胃等量生理盐水， 每日灌胃 1 次，连续给药 20 天。末次给药前 12h，动物禁食，给药后2h 取血，用于测定指标。 2.3 机械压痛法痛阈值实验[3] 将大鼠固定于有机玻璃制作的大鼠固定器中，尾部暴露在外，于试验台上静置 5 分钟，待 其安静后，用弹簧压力计置于大鼠尾部远端 1/3 处，缓慢加压，记录动物疼痛开始嘶叫时的压 力值，作为机械刺激痛阈。 2.4 大鼠坐骨神经传导速度(MNCV)的测定[4] 戊巴比妥钠麻醉动物，俯卧位固定。刺激电极置于坐骨切迹处的坐骨神经传出部位，记录 2 电极置于踝关节坐骨神经经过部位，参考电极在刺激电极与记录电极之间，距记录电极 1 cm 处。 用单脉冲方波刺激，波宽 0.1 ms，刺激强度 1.5 倍阈值。每两个刺激之间间隔 5 s 以上。控制室 温在 20±0.5 ℃。计算机记录从刺激神经开始到远端肌肉出现动作电位的时间，即潜伏期。重复 测定 7～10 次，计算平均值。将动物后足以自然肢体状态与脊柱成 45 ℃角向斜后方拉直，沿 动物体表准确测定刺激电极到记录电极之间的距离。用下列公式进行计算： 运动神经传导速度(m/s) ＝刺激电极与记录电极间的距离／潜伏期 2.5 坐骨神经病理形态观察[5] 戊巴比妥钠麻醉大鼠，分离左侧坐骨神经，自根部向远端取约 3 cm 的坐骨神经，上段约 1.5 cm 放入 1 % 四氧化锇溶液中染色，12 h 后取出，蜡块包埋，切片，用以观察坐骨神经髓鞘 的病理变化及药物的影响；所取坐骨神经下段约 1.5 cm 以4 % 甲醛固定，苏木素-伊红染色，石 蜡包埋、切片，用以观察坐骨神经形态的病理变化及人参白虎汤的的药效学作用。 2.6 半定量观察坐骨神经形态的病理变化[5] 纵切神经标本，镜下观察 25～30 根有髓神经纤维，计数变性纤维（结周脱髓鞘、磷脂过 度褶皱、结间隙增多、节段性脱髓鞘、髓鞘发生溃变/Wallerian 变性），并计算变性纤维百分率。 3 实验结果 3.1 人参白虎汤对糖尿病大鼠痛阈值的影