肝必康胶囊抗鸭乙肝病毒的实验研究.pdfVIP

中国中医药科技2011年3月第 18卷第2期 Mar．2011Vo1．18No．2 ·97 · · 中药研究与开发 · 肝必康胶囊抗鸭乙肝病毒的实验研究术 钟正贤 何开家 李燕婧 陈学芬 黄仁彬 卢文杰 广西中医药研究院 ·南宁530022 广西医科大学药学院 ·南宁530022 摘 要 目的：观察肝必康胶囊体 内抗鸭 乙型肝炎病毒 DHBV 的作用。方法：采用广西麻鸭 乙型肝炎 动物模型，用肝必康胶囊灌 胃，治疗 1周 1_7 、2周 T14 、停药3天 P3 时检测用药前后血清中的DttB— VDNA、DHBsAg、DHBeAg及血清转氨酶 ALT、AST ，并取肝组织进行 HE染色，光镜观察病理学变化。结 果：与模型对照组比较 ，肝必康大、中剂量用药2周 T14 后能使血清中DHBVDNA含量总体水平显著降 低 P 0．05 ，用药 1周后鸭血清HBsAg、HBeAg滴度开始下降，肝必康大、中剂量组有显著性差异 P 0．01 。肝必康胶囊用药后血清中ALT及AST活性有明显下降趋势 P 0．01 。病理学观察表明肝必康 胶囊对肝组织病理变化有明显改善作用。结论：肝必康胶囊连续用药2周具有抗鸭乙肝病毒、降低转氨 酶活性及改善鸭肝脏炎性病变作用。 主题词 肝必屠己／药理学 肝炎病毒 ，乙型／药物作用 鸭 肝必康胶囊系本院研制的纯中药抗肝炎制剂，由三叶香 生物技术有限公司。 茶菜、甜茶藤、溪黄草、灵芝等 10味中草药组成 ，具有清热解 1．4 主要仪器 实时荧光定量PCR仪：Bio—Rad公司；iCy— 毒、利湿退黄、保肝降酶等作用。临床上用于乙肝病毒引起 cleriQ酶标仪：Bio—Rad公司；Model450双光束紫外分光光 的急、慢性肝炎和黄疸等症效果良好。我们前期进行了肝必 度计 ：美国PE公司；LAMBDABIO20凝胶电泳成像分析系 康胶囊药效学研究工作 ，证实其具有抗肝损伤及免疫增强作 统 ：美国Bio—Rad公司；GelDoc2000可见分光光度计 ：上海 用…。体外实验研究表明肝必康胶囊对2215细胞分泌的乙 精密科学仪器有限公司。 型肝炎病毒表面抗 原 HBsAg 和乙型肝炎病毒 e抗 原 2 实验方法 HBeAg 有抑制作用 ，为进一步研究肝必康胶囊的体 内 2．1 动物模型制备 采用健康成年麻鸭产的蛋孵化的1日 抗乙肝病毒作用，本实验采用鸭乙型肝炎病毒感染模型，研 龄雏鸭，随机取 12只为正常对照组，其余均经腹腔注射 究肝必康胶囊对鸭乙型肝炎病毒的抑制作用，现报道如下。 0．2mlDHBVDNA阳性病毒血清。接种 1周后 ，分别从胫静 1 实验材料 脉采血约0．2～0．3ml，装入一次性Eppendorf管中，整个过程 1．1 实验动物 Wistar大鼠，体重 250±20 g，雌雄各半 ， 注意不要交叉污染。10000r／rain离心 5分钟，取血清。经 SPF级 ，由广西医科大学实验动物中心提供，实验动物生产 PCR法检测筛选出感染阳性鸭，饲养至 13日龄作为实验动 许可证号：SCXK 桂 2003—0003。广西麻鸭，体重 50±5 物。随机分组进行药物治疗实验，每组 12只。 g，1日龄，雌雄不拘，购 自广西畜牧 良种养殖场。动物室温 2．2 实验分组及用药 将 DHBVDNA阳性的 13日龄鸭60 度： 25±2 ℃，相对湿度： 604-2 ％。喂标准颗粒饲料，自 只随机分为 5组，每组 12只。正常对照组：等量的生理盐 由饮水和摄食。 水 ；模型对照组：等量的生理盐水；阳性药物对照组：阿昔洛 12 药物 肝必康胶囊 ：由广西中医药研究院提供 ，实验时 韦0．1m kg·d一；肝必康大剂量组 ：肝必康 1．5粒 ／kg · 用蒸馏水配制成所需浓度的药液供动物灌胃用。阿昔洛韦 d～；肝必康中剂量组：肝必康 1．0粒／kg·d～；肝必康小剂 ACV ：湖南迪诺制药有限公司医药工业研究所生产，批号 ： 量组：肝必康0．5粒／kg·d～；各组动物在同等条件下饲养， 座机电话号码。 均以每 日2次，早晚各 1次空腹灌胃，连续给药2周。 I．3 试剂 Taq酶、dNTP：美 国MBI公司；SYBRPremixEx 2．3 取材 于用药前 TO 、用药 1周 ，丌 、用药 2周 Taq ：宝生物工程 大连 有限公 司；HBVDNA荧光定量 T14 、停药 3天 P3 时，分别从颈静脉抽血，每只 1m]左 PCR试剂盒 ：深圳匹基生物工程股份有限公 司；50xTAE：北 右，分离血清，于一20~C保存备用。于停药后3天将实验动 京博大泰克生物基因技术有限责任公司；DNA片段玻璃奶 物剖杀，各取 小块肝组织 固定于酒精醋酸