肿瘤坏死因子前体换酶前转肽结构域对TACE活性调节作用.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(4)：783—787 · 783 · [文章编号] 1000—4718(2008)04—0783—05 肿瘤坏死因子前体转换酶前肽结构域对 TACE活性调节作用 李小鸥 ， 阎 媛 ， 黄 巍 ， 杨渝珍抛， 王宏伟 (华中科技大学同济医学院。附属同济医院儿科，生化与分子生物学系，湖北 武汉 430030) [摘 要] 目的：探讨肿瘤坏死因子前体转换酶 (TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用 ，为 人工干预炎症过程提供依据和手段。方法：以pIRES2一EGFP质粒为载体，利用 DNA重组技术分别构造含信号肽 结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域的真核表达重组体，根据其碱基数 目分别命名为 pIRES2一 EGFP／T648、pIRES2一EGFP／T2472、pIRES2一EGFP／T57一T1824；真核转染 U937细胞；LPS刺激转染细胞后，用 ELISA法及流式细胞技术检测TNF— 。结果：pIRES2一EGFP／T648的真核表达能显著抑制 TACE的活性，减少 sTNF—Ot分泌，抑制率达61．09％；plRES2一EGFP／T57一T1824的真核表达对 sTNF—Ot的分泌无影响；pIRES2一 EGFP／T2472的真核表达能显著增加 sTNF—Ot分泌。结论：前肽结构域在TACE的成熟过程中起 了双重作用， TACE抑制剂的研制和开发为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。 [关键词] 肿瘤坏死因子转换酶；Pro区域 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Theregulation oftheTACE pro—domain to tumornecrosisfactor一0【 convertingenzymeactivity LIXiao—on ，YAN Yuan ，HUANGW ei，YANG Yu—zhen ，WANG Hong—wel’ (DepartmentofPediatrics，DepartmentofBiochemistry＆MolecularBoilogy，TongfiMedicalColelge，HuazhongUniversity ofScienceandTechnology，Wuhan430030，Chn／a．E—mail：yangyz@ma il．tjmu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Tostudyfunctionsofpro—domainintumornecrosisfactor—Otconvertingenzyme(TACE) maturationandtodevelopanapproachtointerferewithinflammationprocesses．METHODS：TheplasmidplRES2一EGFP wasusedtogeneratetheexpressionplasmidsconstructedwiththesignalpeptideandpro—domain，fulllengthorwithout thepro—domain(designatedaspIRES2一EGFP／T648，plRES2一EGFP／T2472，plRES2一EGFP／T57一T1824，respec— tively)．TheplasmidswereusedtotrnasfecttheU937cells．Mterthe~ansfectedcellswerestimulatedbyU)S．theeffectof expressionplasmidsonTNF— secretionwasdetectedbyELISAnadflowcytometry(FCM)．RESULTS：Theplasmid plRES2一EGFP／T648 inhibited61．O9％ T