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370 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会
1材料与方法
1．1实验动物与饲养管理
饮水经121℃高压灭菌30min，动物自由取食饲料和饮水。
1．2受试物及配制
新鲜蜂王浆(江西农业大学蜜蜂研究所)，储存于一18。C，每天新鲜配制。
1．3试剂与仪器设备
Gencrmic
DNA
的分析纯高氯酸(南通朗源化工有限公司)，分析纯磷酸二氢钾(北京中西远大科技有限公司)。
2—16K高速冷冻离心机(SIGMA)，Fine-doX3凝胶成像系统(天能科技上海有限公司)，DK一8型电
热恒温水浴锅(上海东星建材试验设备有限公司) ，DYY-6C型电泳仪(北京市六一仪器厂)高效液相色
谱仪(HPLC 1200series)。
AgilentTechnologies
1．4试验方案设计
本试验分为四个组，每组各8只大、小鼠，采用灌胃的方式，连续四周喂食蜂王浆。试验A组至C组
小鼠按0．2ml／109，试验D组为对照组，灌胃等量普通饮用水。
1．5基因组DNA甲基化水平的检测
1．5．1基因组DNA的提取及检测
u
取-80。C冷冻的脑、肝、肾及血液，组织用lOOmg，血液用150l，用DNA提取试剂盒按操作步骤逐
一提取其中的DNA，1％琼脂糖凝胶电泳检测其是否含有DNA及DNA的提取质量川。
1．5．2样品的前处理
l
u DNA样品，加20u1质量浓
样品水解：将DNA提取液于40o(：烘箱至液体大部分蒸发，然后取20
度为70％的高氯酸，沸水浴1．5 h，上清液备用。
h，NaOH调pH为7．O～9．0，12000转／min离心l
1．5．3高效液相色谱分析基因组DNA甲基化水平
高效液相色谱分析C和52一meC含量：色谱柱为WatersC。。(150mm×416mm)，流动相含体积分
数为lOmmol／L的磷酸二氢钾，流速0．8ml／min，检测波长为280nm，进样20ul。以c和5-meC为标
1．6数据处理
用SPSSl6．0软件进行分析组间差异显著性。
2实验结果
提的DNA条带清晰，杂质少，符合实验要求。
罔1丈鼠肝脏DNA电泳(从左至右卜1l孔为样品，12孔为1kbmark)
fromleftto
DNAextractionand s detectionofrat1iver(卜11hole
Fi93 E1ectrophoresi right
is 12ho]e1slkbmark)
sample
2 l C和5-meC的保留时间
min09s，5 41
从图2，圈3，图4司看出，色谱分析得，C保留时间3 meC的保留时间6minst出峰
叫问和标品的标准曲线如下。
z 4 e 5 10 m“
编号 时间 峰面积 峰高 峰宽 对称因子 峰面积％
1 3 089 1793 9．1 0 265 0 271 57762
2 6406 13l2 3 9 0
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