整体床免疫微反应器的在线分析探究.pdfVIP

使用毛细管电泳仪20psi压力驱动，在通入异硫氰基荧光素标记的睾酮3位全抗并平 衡后，尝试用两种洗脱剂圆：甲醇和甘氨酸一盐酸(PH=2．5)洗脱被固定化抗体特异性捕 获的标记抗原，通过出峰情况判断洗脱能力。 1．3非特异性吸附的洗脱 制作空白柱研究此整体床微反应器的非 特异性吸附。抗体偶联步骤中用偶联液代替 抗体偶联液，其他步骤同上。比较了用PB，PBST 冲洗以及先通入O雅(卵清白蛋白)再用PB冲 洗三种模式。冲洗步骤见右表。 2．结果与讨论 2．1整体床免疫微反应器的制作 聚甲基丙烯酸酯整体床制各简单，快速，背压小。适合作为毛细管免疫微反应器的载体。 2．2洗脱剂的选择 由于甲醇浓度太高时荧光量子产率低，而甲醇浓度太低则不能完全洗脱，故选 择80％甲醇，水溶液进行洗脱。结果表明80％甲醇洗脱效果好，而甘氨酸-盐酸 (PH=2．5)无法洗脱吸附的标记抗原(图1)。 2．3非特异性吸附的洗脱 结果表明，使用PBST冲洗可洗去非特异性吸附的标记抗原；先通入OVA可饱和非特 异性吸附位点，也可排除非特异性吸附对标记抗原特异性洗脱的干扰(图2)。 图2．非特异性吸附的洗脱 一 ——PB ——PBST L 一^——OVA+ F 3．展望 在成功的制备了整体床免疫微反应器并对其洗脱溶剂，非特异性吸附等问题进行 考查的基础上，我们将对固定化抗体的富集和检测能力进行考查。通过进一步提高偶 联抗体的数量和质量，基于紫外检测的毛细管电泳在线免疫预富集．分离模式将有望得以 实现。 参考文献 [1】PeLersonD M S．RohrT，SvecF，Fr6chetJ J^r】a1．Chem，2002，74．4081—4088 [2]ETurict，P，Fcrnalldcz，cPerez吨ondeeLa1 FreseniusJAnalcllem(1999)365：658—662 整体床免疫微反应器的在线分析探究 作者： 陈泓序， 黄挺， 张新祥 作者单位： 北京分子科学国家实验室(筹)北京大学化学与分子工程学院,北京,100871 引用本文格式：陈泓序.黄挺.张新祥 整体床免疫微反应器的在线分析探究[会议论文] 2006