神经干细胞原代培养及其GABA能神经元的诱导分化.pdfVIP

of of9mAnhuiProvincial Neurosurgery 安徽省第9次神经外科年会论文汇编 Symposium Congress 神经干细胞原代培养及GABA能神经元的诱导分化 鲁 明 傅先明 牛朝诗汪业汉钱若兵 安徽省立医院神经外科合肥230001 【摘要】目的探讨神经干细胞(NSC)的原代培养及7一氨基丁酸(GABA)能神经元的诱导分化、鉴定。 细胞；用含10％血清分化液分化1d后，神经球开始贴壁，伸出细长突起，部分可和周边神经球伸出的突起连 39)0A。结论成功从新生大鼠脑组织中分离、培养了NSC，并能较大比率分化GABA能神经元。 stem 随着中枢神经系统中神经干细胞(neuralcells，NSC)的研究深度和广度的不断扩展，人们对干细 胞的了解更加全面，具有定向分化能力的NSC已被成功用于移植治疗中枢神经系统退行性疾病，如帕金森 病、癫痫、脑外伤后遗症等。由于成年动物体内不具备使NSC增殖和成熟的环境，体内不能直接获得足够的 acid，GABA)能神经元 aminobutyric 移植治疗癫痫的研究，现就NSC的原代培养及7一氨基丁酸(gamma 的诱导分化、鉴定进行探讨。 1材料与方法 养基、B27、表皮生长因子(epidermalgrowth acidic fibrillaryprotein，GFAP) 四季青公司；兔抗鼠巢蛋白(nestin)IgG、兔抗鼠胶质纤维酸性蛋白(glial acid，G1月)IgG acid，GABA)IgG、兔抗鼠谷氨酸(glutamic IgG、兔抗鼠丫一氨基丁酸(gammaaminobutyrie 免疫组化试剂盒及免疫荧光试剂盒均购自武汉博士德公司；其余试剂为国产分析纯。所用荧光显微镜及成 像系统为Nikon 液：lO％胎牛血清+DMEM／F12+EGF20弘g／l；终止消化液：10％胎牛血清+DMEM。 1．2 ml注射器针管中，挤压后0．25％胰酶消化 NSC体外培养及鉴定无菌取新生大鼠全脑，置人2 加人完全培养液，移人放有经多聚赖氨酸处理过的载玻片的培养皿中，37℃、5％COz培养箱内培养。 采用免疫细胞化学染色方法鉴定NSC buffer saline，PBS)洗涤，4％多聚甲醛固定10min，PBS洗涤后3％H202封闭10 tonX一10020 洗后an-抗生物素化羊抗兔lgG室温30rain，PBS洗涤，加入SABC20min，PBS洗涤、再加入FITC室温下 20min，PBS洗涤，染色结束后置荧光显微镜下观察结果、拍照。 1．3 GABA的诱导分化和分化率诱导分化组：培养的NSC离心后弃上清，加入含10％胎牛血清诱 皿中，37C、5％CQ培养箱内培养。自然分化组：培养的NSC离心后弃上清，加入完全培养液，移入到放有 224 of of9。“AnhuiProvincialCongress 安徽省第9次神经外科年会论文汇编 Symposium Neurosurgery 多聚赖氨酸处理过的载玻片的培养皿中，37℃、5％