醋酸铅对鲤鱼卵巢上皮细胞抗氧化功能的影响.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜内科学分会 中国·南昌 第七届代表大会暨学术研讨会论文集 species 铅对机体各个组织都具有很强的毒性，可以与机体内很多酶类和氨基酸的功能团结合， 干扰机体的正常功划¨。Pb能促进活性氧自由基(ROS)的生成，破坏机体氧化还原的动态 平衡，使机体处于氧化应激状态。氧自由基(Reactive oxygenspecies)被报道在细胞信号肽 中发挥很重要的作用，并且主要存在于细胞增殖和凋亡过程中。也有研究表明外源性污染物 进入生物体后，会导致大量活性氧自由基的产生，与DNA、蛋白质和多元不饱和脂肪酸作 用，造成DNA链断裂和氧化性损伤、蛋白一蛋白交联、蛋白一DNA交联和脂质过氧化。脂 质过氧化是造成生物体氧化损伤的主要原因，它可使膜的通透性增加，膜结构及其功能受到 损伤，最终对生物体造成损伤。机体的抗氧化系统包括谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)，谷胱 甘肽还原酶(GR)，过氧化氢酶(CAT)，超氧化物歧化酶(SOD)等，在清除氧自由基， 维持细胞氧化还原平衡中发挥重要作用【2】。近年来关于铅暴露于动物体内试验研究显示，铅 能够导致活性氧自由基(ROS)的产生，脂质过氧化作用的加强，降低抗氧化防御体系，有 力地证明氧化性应激作用在铅中毒机制中具有重要的作用【3】。本研究用不同浓度的醋酸铅溶 液作用于鲤鱼卵巢上皮(CO)细胞，探索铅对淡水鱼类的生殖毒性机理，通过确定特异的 生物标识，从而便于加强对铅的监测力度。 1．材料与方法 1．1细胞与培养液 cells)，由深圳出入境检验检痰局动 鲤鱼卵巢上皮细胞(cyprinuscarpioovaryepithelial 植物中心水生动物国家重点实验室提供。 M199培养基，(Gibco)。 1．2主要试荆 过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH．PX)、 超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、蛋白含量测定(BCA法)等试剂盒，均购自 碧云天生物技术研究所。醋酸铅、冰醋酸(AR)、无水乙醇等，均为实验室常规分析纯试 剂。 1．3主要仪器 数显电热恒温水浴箱HWS26型；上海一恒科学仪器有限公司； 高压灭菌锅 VX．100SYStec； 高速冷冻离心机 3k30 Sigam： TJ； Casy细胞体积及数目实时分析系统CASY 细胞恒温培养箱 BINDERKBl15： 微孔式连续光谱测度系统 MAX SPECTRA plus384： 1．4细胞培养及染毒处理 将卵巢上皮细胞接种于含有10％FBS(胎牛血清)、100 Pg．mL1青链霉素的M199培养 基的25cm2细胞培养瓶中，然后置于25℃恒温培养箱中培养，待细胞贴壁生长约800左右 中国畜牧兽医学会家畜内科学分会 中国·南昌 第七届代表大会暨学术研讨会论文集 化，更换新的M199完全培养基(含10％FBS，100 Fg·nlL‘1青链霉素)重新悬浮细胞，将细 niL／孔，转移到24孔板中，放置于25℃恒温培养箱中培 胞浓度调整至1×105个／mL，按l 养，待细胞稳定生长后，全量更换培养基，每孔分别加入含0，50，100，200“M·L．1醋酸铅