两种方法制备黄河鲤鱼染色体的比较及条件的优化.pdfVIP

北方七省市区动物学会2011年会论文集 前染色体制片的趋势，随着现代分子生物学的飞速 上部细胞悬液，移入培养瓶内，再加入适量培养液， 发展，不断涌现出诸如分子标记技术、原位杂交技 使每瓶为4或5毫升。细胞于28℃的恒温箱中培养 (n 术，尤其是荧光原位杂交技术的突飞猛进，再次突 L斯佩克特等，，分别在培养1d，2dJ3d后 显出染色体制各的重要性。 制片。同时在收集细胞制备染色体标本前loh、2oh、 30h，需用注射器往培养瓶里滴加秋水仙素，终浓 1材料和方法 度为05微克，毫升。收集培养细胞时，简单摇动培 1 1材料 养瓶，使沉在瓶壁上的细胞重新悬浮在培养液里， 本实验材料为黄河鲤鱼，5雌5雄，体长，体重 然后倒进离心管。再用吸管吸取少许生理盐水，进 尽可能一致。均采自新乡市农贸市场。 一步将残留的细胞洗出，倒进离心管。将上述收集 12方法 好的细胞离心。离心速度700．1000转缸m，时间 1 8min。离心毕，轻轻吸除上清液，仅留05nll细胞 2I体内注射PHA短期培养法按lop∥g的剂 量在黄河鲤鱼胸鳍基部注射P}LA(上海伊华临床医沉淀。用吸管轻轻吸打，使成细胞悬液。加4ml低 学科技公司产品)，一次注射，24 渗溶液，吸打均匀，室温静置30—35rain。其后制片 h后按4¨g,／g注 射秋水仙素，4h后解剖取肾，置生理盐水中撕碎． 同体内注射法。 mol／LKCI 分散肾组织。离心收集肾细胞，在0075 2结果 溶液中37℃低渗30min。随后1000转／衄离 21培养时间分别为ld、2d、3d时的中期染色体分 心8min．弃上清，用新配制的卡诺固定液(甲醇：冰 裂相 醋酸=3：1)固定15min后再离心，重复2．3次。 5 黄河鲤鱼肾细胞接种后，分别培养了1d，2d， 然后弃去上清液，加入0 InL固定液，制成悬液 3d，经过对标本上2000个左右的细胞分裂相的测 并滴于预先冰冻过的载玻片上。干燥后用Giemsa 量、对比分析发现：在秋水仙素浓度，培养时间等 液(用口H=68的磷酸缓冲液以1：9稀释)染色10 分钟。最后用自来水简单冲洗，随水倾去染液，待 其他条件一定的情况下，中期染色体分裂相在第三 玻片干燥后即可观察并照相。 天达到最多(如表1)，染色体长度最长，效果最理 l 2．2肾组织细胞培养法将实验鱼去鳞。无菌条件 想，且前三天获得的中期染色体分裂相逐渐增多， 长度也逐渐变长。此外，对培养3d制各的染色体放 下取出肾组织，在3．5毫升培养液(TC一199培养液： 加20％tJ、牛血清，并加青霉素、链霉素和卡那霉素， 大后进行核型分析发现，黄河鲤鱼的核型为 2n-20m+38sIll+20s什22t。 使终浓度分别为100单位、100微克和50单位／毫 升，调PH=72)中制成细胞悬液，用刻度吸管吸取 裹1不