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第十届全国环境与职业医学研究生学术研讨会论文集 ·119·
小心弃去上清；缓慢沿管壁加入1mL75％的乙醇，轻轻上下
样前体蛋白(fl-amyloidprecursorprotein，13-,气ee)经争分泌酶和
颠倒；120004qc离心5rain，弃上清保留沉淀，室温干燥；
丫．分泌酶连续裂解所产生的p淀粉样蛋白(amyloid13-protein， rpm
Ap)是构成sP的主要成分。BACEI是体内主要的p分泌酶，溶解于适量DEPC水中，保存于一86℃冰箱。
1．5．2 Itl、fA
在AB的形成过程中起重要作用。本实验通过研究铝对PCI2细 RNA浓度和纯度测定总RNA浓度测定：取29L
胞BACEl蛋白及基因表达的作用，来探讨铝致AD的可能机溶液，用无RNA酶水40倍稀释，以无RNA酶水作为空白对
制，为迸一步研究铝的神经毒性提供理论参考。
1材料与方法 RNase酶水调整各组核酸浓度基本一致。
1．1实验对象及分组
PCI2细胞根据实验设计分为：09mol／L麦芽酚铝组；生水做空白对照，读取分光光度计0I)：6dOD2∞比值。纯RNA样品
的OD2sdOD280为1．8—2．0，若低于1．8则表明有蛋白质污染。
理盐水组；50lmaol／L麦芽酚铝组；100lanol／L麦芽酚铝组；
1．5．3
2009mol／L麦芽酚铝组：400lamol／L麦芽酚铝组，共6组，其中
0 取出的总RNA，0．5 lit
gmol／L麦芽酚铝组作为空白对照组，生理盐水组是作为溶剂 Enzyme
6
对照组。将细胞接种在含10％胎牛血清、5％马血清、100U／mLMix，0．5此Randomme瑙，2灶5XPrimeSefiptBuffer，补充
RNase-free
青霉素及100U／mL链霉素的DIvIEN培养基中，于37℃、饱和ddH20
3．5此至10皿，轻轻振荡混匀，放入PCR仪
湿度、5％C02浓度下培养。 37℃15min，850C5sec。反转录后的eDNA贮存在一86℃备用。
1．2主要试剂及药物 1．5．4引物序列以及实时荧光定量PCR反应条件大鼠BACEl
BACEl酶联免疫吸附测定试剂盒(武汉优尔生生物工程有
限公司)；麦芽酚、灿C13(Sigma公司)；引物合成(Takara公司)；
表1引物序列
RNAi80 RT
Plus(DOIOSA)(Takara公司)；PremeScriptreagent
Table1 Primer information
seqllellCe
PremixEx
妇(I)9108A)(Takara公司)；SYBRTaqII(DRIt081A)
(Takara公司)。
1．3主要仪器
二氧化碳培养箱(美国thermo公司)；SW-CJ．2F型超净
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