铁皮石斛谷氨酸脱羧酶基因的分离与生物信息学分析.pdfVIP

中国医药生物技术 2014年 10月第9卷第5期 ChinMedBiotechnol，October2014，Vo1．9，No．5 DOI：10．3969／cmba．j．issn．1673-713X．2014．05．002 · 论 著 · 铁皮石斛谷氨酸脱羧酶基因的分离 与生物信息学分析 张岗，胡本祥，李依民，张大为，郭顺星 【摘要】 白 (calmodulin，CaM)结合域，能够与 CaM 结 目的 分离珍稀濒危兰科药用铁皮石斛谷氨酸脱羧酶 合增加酶活。植物受低温、高温、高盐或伤害等外 (GAD)基因并进行生物信息学和表达分析。 源环境因子刺激时，胞内产生 Ca2峰，进而结合 方法 采用 RT-PCR 和 RACE技术获基因 cDNA 全长； CaM 活化 GAD 蛋 白，最终导致胞 内积累大量 利用生物信息学软件分析蛋白理化性质、结构域和三维建模 GABA。拟南芥 GAD1和 GAD2酶活受 Ca2+／CaM 等分子特性；用 DNASTAR6．0和 MEGA4．0分别进行氨 处理分别上调 35倍和 l3倍 ，AtGAD2基因受外 基酸多序列比对和进化树分析；借助实时定量 PCR检测基 源 NH4C1、NH4NO3、谷氨酸等营养物处理诱导， 因表达 。 参与调控植物氮代谢_4J。香蕉 MaGAD1基因的表 达与果实成熟及 乙烯生物合成密切相关L7J。人参 结果 分离到 DoGAD 基因，cDNA 全长 1795bp，编码一 条 由 498个氨基酸组成的多肽，分子量 55．90kD，等电点 PgGAD 基因响应高盐、高温、H2O2等处理，可能 在非生物逆境胁迫反应中起作用[81。因此，GAD 介 5．32；DoGAD 蛋白不含跨膜域或信号肽，具有谷氨酸脱羧 酶和磷酸吡哆醛依赖的脱羧酶结构域 (17—443、37．381)； 导的 GABA 合成途径对调节植物体的生长发育和 非生物逆境胁迫等生命活动至关重要 。 DoGAD 与植物 GADs蛋 白一致性为 69．5％～78．8％，隶 属于 GADs分子进化树的植物类群；DoGAD转录本在石 铁皮石斛 (Dendrobium officinaleKimuraet 斛叶和茎中相对表达量较高，分别为根中的 5．16和 3．92倍。 Migo)为兰科 (Orchidaceae)石斛属 (Dendrobium) 多年生草本植物，是石斛属药用植物中最为珍稀 结论 成功克隆得到铁皮石斛谷氨酸脱羧酶基 因全长 ， 名贵的种。石斛属植物主要含有多糖、芪类、酚 DoGAD 的表达特征暗示其可能在铁皮石斛叶和茎中发挥 类、氨基酸等活性成分，具有重要的药理作用 J。 重要的调控作用。 GABA 在石斛药理功效方面的作用 尚不清楚。前 【关键词】铁皮石斛； 谷氨酸脱羧酶； v．氨基丁酸； 期，我们利用 SSH 技术富集铁皮石斛种子共生萌 计算生物学； 基因克隆 发差异表达基因ll…，分离得到一条 587bp的表达 www．cmbpnet．cn 中国医药生物技术20149(51．328．334 序列标签 (expressionsequencetag，EST)，与蓖麻