《牛型布氏杆菌苹果酸脱氢酶单克隆抗体的制备及鉴定》.pdfVIP

中国兽医科学 2012，42(O6)：596—600 ChineseVeterinaryScience 中图分类号 ：S852．614 文献标志码 ：A 文章编号 ：1673—4696(2012)06—0596—05 牛型布 氏杆菌苹果酸脱氢酶单克隆抗体的制备及鉴定 童永亮 ，韩先干 ，孙晓庆 ，丁 铲 ，胡青海 ，丁家波。，．王豪举h，于圣青 (1．西南大学 动物科技学院，重庆 400716；2．中国农业科学院上海兽医研究所， 上海 200241；3．中国兽医药品监察所 ，北京 100081) 摘要 ：为制备牛型布氏杆菌(Brucellaabortus)苹果酸脱氢酶 (MDH)单克隆抗体 ，将牛型布氏杆菌A19 菌株的MDH基因进行克隆和表达 ，表达产物被纯化后作为免疫原，按常规方法免疫BALB／c小鼠。取免疫 鼠脾细胞与 SP2／O骨髓瘤细胞融合，经亚克隆和 间接 ELISA筛选，最终获得 3株分泌牛型布氏杆菌 MDH 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别被命名为 C2、D5和 F4。ELISA检测结果表 明，3株杂交瘤细胞培养上 清的抗体效价为 1：1600～1：3200，小鼠腹水效价为 1：12800～1：25600；Western—blot检测结果表 明， 3株单克隆抗体均能与牛型布氏杆菌 MDH重组蛋 白发生特异性反应。结果表明，本研究成功制备 了牛型 布氏杆菌MDH 蛋白单克隆抗体 ，为基于MDH 的布氏杆菌检测方法的建立奠定 了基础。 关键词：牛型布氏杆菌；苹果酸脱氢酶 ；单克隆抗体 Preparationandcharacterizationofmonoclonalantibodiesagainst BrucellaabortusM DH recombinantprotein TONG Yong—liang ，HAN Xian—gan ，SUN Xiao—qing ，DING Chan ， HUQing—hai，DINGJia_bo。，WANG Hao—ju ，YU Sheng—qing。 (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，SouthwestUniversity，Chongqing400716，China；2．Shanghai VeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Shanghai200241，China； 3．ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl，Beijing100081，China) Abstract：Themalatedehydrogenase(MDH)ofBrucellaabortusA19wasexpressed，purifiedandused forimmunizationtoBALB／cmice．ThespleencellsoftheimmunizedBALB／cmicewerecollectedand fusedwithSP2／Ocells，afterthreesub—clones．Threehybridomacel1strainsC2，D5andF4，whichsecret specificmonoclonalantibodies(MAbs)againstMDH ，wereobtainedbyELISA．Theantibodytitersinthe cel1culturesupernatantandasciteswerefrom 1：1600to1：3200andfrom 1：12800to1：25600．re— spectively．W estern—blotanalysisshowed thatthreeM Absreactedwith expressedbrucellaMDH protein specifically，whichprovidedbasisforfurtherstudyofM DH． Keywords：Brucellaabortus；malatedehydrogenase；monoclonalantibody 布氏杆菌病 (brucellosis)是 由专性细胞 内寄生 3种共 16个型的布氏杆菌 [1。]。我国 31个省 (市 、